点変異イオンチャネルを発現させたマウスによる神経変性症の解析

表达点突变离子通道的小鼠神经变性分析

• 批准号: 11877009
• 负责人: 島田 昌一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877009/
• 关键词: 神経変性疾患; 酸味受容体; イオンチャネル; トランスジェニックマウス; 遺伝子

本研究はMDEG1イオンチャネルの第二膜貫通部位に人工的な点変異を導入し、この陽イオンチャネルが開いたまま閉じない状態を作り出し、このgain of functionの特殊なチャネルをトランスジェニックマウスに発現させて、味覚障害や神経変性症のモデル動物を作成することが目的である。MDEG1の430番目のグリシン残基をPCR法を用いて様々なアミノ酸に置換し、電気生理学的に解析した結果、フェニルアラニンに置換させたものが最も効果的にチャネルが開いたままの状態になることを明らかにした。さらにミュータントイオンチャネル(MDEG1-G430F)を発現させた細胞に、選択的な細胞死が起こることを確認した。このMDEG1-G430FのcDNAにopsinのプロモーター・エンハンサー領域をつなげて岡部らと共同研究でトランスジェニックマウスを作成した。現在そのトランスジェニックマウスがどの様な障害をきたしたか、形態学的、生理学的な解析を進めている。また、堀本らと共同研究で、このMDEG1-G430Fミュータントに、がん特異的プロモーターを組み込んだものを、リポゾーム法を用いて、転移がんモデルマウスに投与し、がん細胞の選択的な細胞死を引き起こすモデルマウスを作成した。

In this study, artificial changes in the second membrane penetration site of MDEG1 were introduced, positive changes in the open and closed states were observed, and gains of function in the development of special changes in the second membrane penetration site, taste disorders, and neurologic disorders were created. MDEG1 430 residues were analyzed by PCR, and the results of electrophysiological analysis were analyzed by PCR. This is the first time that a cell has been identified and selected for cell death (MDEG1-G430F). This MDEG1-G430F's cDNA for opsin is being developed in the field of Internet access and joint research. Now, we can make progress in morphological and physiological analysis. The MDEG1-G430F was jointly studied by Horimoto and Horimoto. It was prepared by using the special selection method, the selection method and the selection method.

项目成果

Mizuno N.: "Molecular cloning and characterization of rat trp homologues from brain"Mol Brain Res. 64. 41-51 (1999)

Mizuno N.：“大鼠脑中色氨酸同源物的分子克隆和表征”Mol Brain Res。

島田昌一: "味覚受容体遺伝子"脳21. 2. 304-308 (1999)

Shoichi Shimada：“味觉受体基因” Brain 21. 2. 304-308 (1999)

Sakata K.: "Cloning of a bovine orphan transporter and its short splicing variant"FEBS Lett. 443. 267-270 (1999)

Sakata K.：“牛孤儿转运蛋白及其短剪接变体的克隆”FEBS Lett。

Ito Y.: "Comparison between the decrease of dopamine transporter and that of L-DOPA uptake for detection of early to advanced stage of Parkinson's disease in animal models"Synapse. 31. 178-185 (1999)

Ito Y.：“比较多巴胺转运蛋白和 L-DOPA 摄取的减少，用于检测动物模型中帕金森病的早期到晚期阶段”Synapse。

Saishin Y: "Retinal fascin: functional nature. subcellular distribution, and chromosomal localization."Invest Ophthalmol Vis Sci. 41. 2087-2095 (2000)

Saishin Y：“视网膜肌成束蛋白：功能性质。亚细胞分布和染色体定位。”Invest Ophasemol Vis Sci。