Molekulare Grundlage der transversalen Dynamik von Phospholipiden im Endoplasmatischen Retikulum von S. cerevisiae

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Das Endoplasmatische Retikulum (ER) ist ein zentraler Ort der Lipidsynthese. Die Stabilität des ER setzt eine schnelle Transbilayerbewegung ('Flip-Flop') der synthetisierten Lipide voraus. Es gibt indirekte Hinweise für das ER von Leberzellen, daß diese schnelle Bewegung durch sogenannte 'Flippase'-Proteine vermittelt wird, die bisher jedoch nicht identifiziert worden sind. Ziel des Projektes ist die Identifizierung solcher Flippasen in S. cerevisiae. Hefezellen sind daüfr aus verschiedenen Gründen (z.B. Züchtung, Molekularbiologie, Genom) besser geeignet als z.B. Leberzellen. Die Identifizierung soll über zwei Wege geschehen. Zum einen werden auf der Basis des Vergleichs der 'Flip-Flop'-Aktivität rekonstitutierter Proteinfraktionen des Wildtyps Flippasen identifiziert (Ansequenzierung, Deletionsmutanten). Zum anderen wird die 'Flip-Flop'-Aktivität im ER von Mutanten, die eine Defizienz hinsichtlich potentieller Kandidaten (z.B. den Translokationsapparat Sec61p) für eine Flippase besitzen, charakterisiert. Das Projekt schafft die Grundlage für eine Identifizierung mikrosomaler Flippause(n) in Säugerzellen. Ein struktureller Vergleich der Flippase(n) in Hefe und Säugern wird zeigen, ob der Phospholipidaustausch in Hefe und in Säugern nach einem ähnlichen, evolutiv konservierten Mechanismus abläuft.