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マイクロアレイ解析の補完としての大量迅速in situ染色スクリーニング法の開発

开发高容量快速原位染色筛选方法作为微阵列分析的补充

基本信息

批准号：
12024230
负责人：
伊藤啓
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

in situ RNAハイブリダイゼーションでは個々の神経の細胞体しか染色されないため、その細胞がどこに投射し、どのような情報処理を担う回路を形成しているのか、すぐには同定できない。しかし膨大なGAL4エンハンサートラップ系統コレクションから、in situ染色像と対応する領域で発現を示すものを検索し、二重染色で比較対照すれば、in situで検出された細胞の厳密な同定と、その細胞が作る回路網の詳細な解析が可能になると考えられる。そこで、二重染色をホールマウント脳標本において安定して行なえるような実験系の開発を行なった。in situ染色を効率よく、かつ感度良く実施するために幾つもの染色プロトコルを比較検討した結果、NBT/BCIPを用いた染色法が最も確実な結果が得られた。また、GAL4エンハンサートラップ系統を用いて強制発現させるレポーターのタンパクの存在を、プロテアーゼ分解処理を伴うin situ染色を施した標本において検出するために、様々なレポーターと検出法の組み合わせを試した結果、クラゲ蛍光色素GFPを発現させ、抗GFP抗体でラベルしてCy3蛍光色素で検出する方法が、最も高感度で高精細な像を得られることが分かった。この成果を用いて、神経伝達物質GABAの産生酵素遺伝子を発現する細胞をin situ染色でラベルし、GAL4エンハンサートラップ系統との二重染色で実際に細胞を同定し、その遺伝子を発現する細胞と発現しない細胞との間の神経線維の投射形態比較が可能なことを実証した。

In situ RNA is responsible for the formation of the cell cycle, the cell body staining, the cell projection, the environmental response loop, and the cell homeostasis. The expansion of the GAL4 system makes it possible for the system to be analyzed in the field of in situ staining, double staining, double staining, in situ, and so on. Double staining and double staining are required to determine the safety and stability of the flag. The results of in situ staining were compared with each other, and the results of NBT/BCIP staining were confirmed by the most accurate staining method. In the system, the GAL4 system is used to determine the presence and resolution of the color tag with in situ coloring. This document is used to verify the results of the test results, the results of the The anti-GFP antibody, Cy3, light pigment, the method, the most sensitive, the most sensitive, the most accurate, the most sensitive, the most sensitive. The results of the experiment show that the double staining of the cell is the same as that of the GABA cell, and the projection pattern of the cell is different from that of the cell, the double staining of the in situ staining system, the double staining of the GAL4 cell, and the projection pattern of the cell in the cell.