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血管内皮細胞における安定な遺伝子発現系の開発

血管内皮细胞稳定基因表达系统的开发

基本信息

批准号：
12032212
负责人：
中西真人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1999年秋、肝特異的酵素の補充のためのアデノウイルスベクターの投与を受けた患者が死亡する事件が起き、その後の調査で多くの臨床試験で副作用による死亡例があった疑いが浮上したため、組換えウイルスを使った遺伝子導入に替わり得る安全性の高い非ウイルスベクターの開発が再び注目を集めている。本研究では、DNA/polymer complexのモデルとしてラムダファージを使って、さまざまな生物学的シグナルの遺伝子導入への応用を検討した。本年度は、細胞膜を通過する活性を持つことが知られているヒト免疫不全ウイルス(HIV)の転写因子Tat由来のペプチドを提示した組換えファージを作成し、その活性を調べた。対象として使った細胞表面のインテグリンに結合するRGD-Phageではマーカー遺伝子の発現はほとんど検出できなかったが、Tat-Phageでは陽荷電リポソームとほぼ同等のマーカー遺伝子の発現を得ることができた。また、Tat-Phageによる遺伝子導入は血清によって阻害されず(むしろ促進される)、マウスの肝臓にin vivoで直接遺伝子を導入することもできた。また、阻害剤を使った実験から、Tat-Phageはエンドゾームを介した取り込み経路に依存せず、Caveolaeを介して細胞内に移行するユニークな系であることも示唆された。Tat Phageによる遺伝子導入の効率はほぼSV40に匹敵し、ウイルスに頼らない遺伝子導入法の中では最も効率がよいものの一つである。また内部のDNAはタンパク質でできた殻によって完全に保護され、血清の存在下でも効率よく遺伝子導入できることはin vivoでの応用が可能であることを示している。この結果は、Tat peptideが人工的な合成ポリマーを使った遺伝子導入系の開発にも有効であることを示している。

In the autumn of 1999, the supplement of liver-specific enzymes caused death in patients, and many clinical trials and side effects caused death in patients. This study aims to investigate the use of DNA/polymer complexes for gene expression and gene transfer in biology. This year, the activity of cell membrane passage is continuously regulated, and the origin of Tat is suggested. For example, RGD-Phage can be used to detect the occurrence of cell surface proteins, such as Tat-Phage, which can be used to detect the occurrence of cell surface proteins. Tat-Phage gene introduction into the serum to inhibit the development of the disease, and its liver in vivo to direct gene introduction. The Tat-Phage pathway is dependent on the Caveolae pathway and the Caveolae pathway is dependent on the Caveolae pathway. The efficiency of Tat Phage is the highest in SV40. DNA in vivo is completely protected, and in the presence of serum, it is possible to introduce DNA in vivo. The result is that Tat peptide is artificially synthesized and introduced into the system.