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遺伝情報を核に輸送するシステムの開発

开发将遗传信息传输到细胞核的系统

基本信息

批准号：
11167251
负责人：
中西真人
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

数個から数十個のアミノ酸残基からなるペプチドを組換えタンパク質の一部として大腸菌で増殖するファージ表面に発現させるディスプレイシステムは、抗体のエピトープ解析に使うエピトープ・ライブラリーや一本鎖抗体ライブラリーとして使われてきた。我々は、ラムダファージが直径55nmの小さな頭部に高度に凝縮した50kbpの直鎖状DNAを封入した粒子であることに注目し、動物細胞で機能するマーカー遺伝子を組み込んだファージをベースに、さまざまなペプチドをDタンパク質との融合タンパク質としてファージ粒子表面に提示してその機能を研究する系を作成した。この系では、Eタンパク質でできたDNAを含む殻(Shell)の外側に外来ペプチドが存在するので、DNAとの相互作用を考慮に入れずに任意のペプチドを自由に提示することができる。またペプチドのアミノ酸配列も遺伝子工学の手法で容易に改変することができる。本年度は、細胞膜を通過する活性を持つことが知られているヒト免疫不全ウイルス(HIV)の転写因子Tat由来のペプチドを提示した組換えファージを作成し、その活性を調べた。対象として使った細胞表面のインテグリンに結合するRGD-Phageではマーカー遺伝子の発現はほとんど検出できなかったが、Tat-Phageでは陽荷電リポソームとほぼ同等のマーカー遺伝子の発現を得ることができた。また、Tat-Phageによる遺伝子導入は血清によって阻害されず(むしろ促進される)、マウスの肝臓にin vivoで直接遺伝子を導入することもできた。また、阻害剤を使った実験から、Tat-Phageはエンドゾームを介した取り込み経路に依存せず、Caveolaeを介して細胞内に移行するユニークな系であることも示唆された。

Several から dozens of のアミノ acid residues からなるペプチドを group replacement えタンパするファージ Surface に発appears させるディスプレイシステムは, ANALYZED ANALYSIS OF ANTIBODIES・ライブラリーや一本 lock antibody ライブラリーとして使われてきた. I am 々は,ラムダファージが diameter 55nmのsmallさなheadにheightにcondensationした50kbp The direct-locked DNA is enclosed in particles and the function of animal cells is maintained.伝子を组み込んだファージをベースに、さまざまなペプチドをDタンパク性とのfusion The surface of the particle and the function of the particle surface are researched and made.この性では、Eタンパク性でできたDNA contains the outer shell (Shell) and the external ペプチドが existsするので,DNAとのinteractionをconsiderに入れずにarbitraryのペプチドをfreeにcueすることができる. The またペプチドのアミノ acid combination sequence も伝子工学のtechnique is easy to change the 変することができる. This year, the cell membrane is active and maintains the activity of HIV. ) の転WRITING FACTOR Tat origin のペプチドをcue した group replacement えファージをmade し, そのActivity を Adjustment べた.対肖として Make the cell surface のインテグリンにcombine RGD-Phage ではマーカー伝子の発appear はほとんど検出できなかったが, Tat-Phage では阳charged リポソームとほぼequivalent のマーカー缝子の発appears ることができた.また, Tat-Phage による缝子 introduces はSerum によって hinders されず (むしろpromotes される), マウスの liver 臓にin Vivo's direct inheritance is imported into the system.また、扤を使った実験から、Tat-Phageはエンドゾームを Introduction した取り込み経路にDependence せず, Caveolae をmediated して intracellular migration するユニークな Department であることもshows instigation された.