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HIVによるMHC class I発現抑制機序の解明と免疫応答の賦活化戦略

阐明 HIV 抑制 MHC I 类表达的机制以及激活免疫反应的策略

基本信息

批准号：
12035221
负责人：
鳥越俊彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12035221/
关键词：
HIV Tat Nef MHC class I Survivin Smac Protein Therapy Apoptosis

项目摘要

HIVに対するprotein therapyを考案し,その基礎的研究を進めている.(1)HIV tat蛋白質の11アミノ酸から成る細胞膜透過ドメインと,GFP蛋白質との融合蛋白質を作成し,細胞内への浸透性について解析した.Tat-GFPは細胞膜を透過しなかったが,Tat-Survivin-GFP蛋白質は透過した.Tat濃度依存性,温度感受性を確認した.ドミナントネガティブSurvivin蛋白質を腫瘍細胞に浸透させたところ,細胞にApoptosisを引き起こすことに成功した.(2)つぎに,Tat細胞膜透過ドメインを含む合成ペプチドが細胞膜を透過することを共焦点レーザー顕微鏡によって確認した.HIV nef蛋白質が発現を抑制するHLA-A分子の細胞質内ドメインから,HIV nef蛋白と会合すると予想される領域を推定し,この領域とTatドメインとの融合合成ペプチドを作成した.現在,Nef発現細胞を作成し,この合成ペプチドがNefの作用を抑制するかどうか実験を行っている.(3)細胞のapoptosisを促進するミトコンドリア蛋白質SmacのN末端機能ドメインとTatドメインとの融合合成ペプチドSmac7-Tatを作成した.このペプチドは細胞内に浸透し,細胞にapoptosisを引き起こすことを確認した.HIV proteaseが発現しているHIV感染細胞内で活性化するような,HIV protease認識配列を組み込んだTat-smac7ペプチドを設計した.これがHIV感染細胞に対して選択的にapoptosisを引き起こすことができるかどうか,今後,検証する.

Protein therapy for HIV is being examined and basic research is being advanced. (1) Cell membrane permeability analysis of Tat protein,GFP protein and fusion protein, intracellular permeability analysis of Tat-GFP cell membrane permeability analysis of Tat-Survivin-GFP protein, Tat concentration-dependent and temperature-sensitive. Survivin protein penetrates into cells and cells successfully. (2)Tat cell membrane permeability is determined by confocal microscopy.HIV nef protein production is inhibited by cytoplasmic binding of HLA-A molecules. HIV nef protein fusion is predicted to occur in the domain of Tat cell membrane permeability. Now,Nef discovery cells are created, and synthesis is inhibited by the action of Nef. (3)Cell apoptosis is promoted by the formation of a fusion protein Smac7-Tat from the N-terminal functional region of Smac. HIV protease is found in HIV infected cells and activated in HIV infected cells.HIV protease recognition and alignment is designed for Tat-smac7. This is the cause of apoptosis in HIV infected cells, and in the future, it will be identified.