HIVによるMHC class I発現抑制機序の解明と免疫応答の賦活化戦略

阐明 HIV 抑制 MHC I 类表达的机制以及激活免疫反应的策略

基本信息

批准号：
12035221
负责人：
鳥越俊彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12035221/
关键词：
HIV Tat Nef MHC class I Survivin Smac Protein Therapy Apoptosis

项目摘要

HIVに対するprotein therapyを考案し,その基礎的研究を進めている.(1)HIV tat蛋白質の11アミノ酸から成る細胞膜透過ドメインと,GFP蛋白質との融合蛋白質を作成し,細胞内への浸透性について解析した.Tat-GFPは細胞膜を透過しなかったが,Tat-Survivin-GFP蛋白質は透過した.Tat濃度依存性,温度感受性を確認した.ドミナントネガティブSurvivin蛋白質を腫瘍細胞に浸透させたところ,細胞にApoptosisを引き起こすことに成功した.(2)つぎに,Tat細胞膜透過ドメインを含む合成ペプチドが細胞膜を透過することを共焦点レーザー顕微鏡によって確認した.HIV nef蛋白質が発現を抑制するHLA-A分子の細胞質内ドメインから,HIV nef蛋白と会合すると予想される領域を推定し,この領域とTatドメインとの融合合成ペプチドを作成した.現在,Nef発現細胞を作成し,この合成ペプチドがNefの作用を抑制するかどうか実験を行っている.(3)細胞のapoptosisを促進するミトコンドリア蛋白質SmacのN末端機能ドメインとTatドメインとの融合合成ペプチドSmac7-Tatを作成した.このペプチドは細胞内に浸透し,細胞にapoptosisを引き起こすことを確認した.HIV proteaseが発現しているHIV感染細胞内で活性化するような,HIV protease認識配列を組み込んだTat-smac7ペプチドを設計した.これがHIV感染細胞に対して選択的にapoptosisを引き起こすことができるかどうか,今後,検証する.

我们已经设计了一种用于HIV的蛋白质疗法，并正在进行基础研究。（1）我们在HIV TAT蛋白的11个氨基酸细胞膜渗透结构域和GFP蛋白之间创建了融合蛋白，并分析了其渗透性到细胞中。 TAT-GFP并未渗透到细胞膜，而是Tat-Survivin-GFP蛋白渗透。确认了TAT浓度依赖性和温度灵敏度。主要的阴性遗传蛋白渗透到肿瘤细胞中，并成功引起细胞凋亡。（2）接下来，我们已经确认包含TAT细胞膜渗透结构域的合成肽通过共聚焦激光显微镜渗透到细胞膜。从HLA-A分子的室内胞质结构域抑制HIV NEF蛋白的表达，HIV我们估计了该区域与NEF蛋白相关的区域，并在该区域和TAT结构域之间产生融合合成肽。我们目前正在创建表达NEF的细胞，并试验该合成肽是否抑制NEF的作用。（3）我们创建了SMAC7-TAT，这是N端功能结构域和线粒体蛋白SMAC的TAT结构域之间的融合合成肽，从而促进细胞中的凋亡。我们已经证实，该肽渗透到细胞中并引起细胞凋亡。我们设计了一种TAT-SMAC7肽，该肽结合了HIV蛋白酶识别序列，该序列在表达HIV蛋白酶的HIV感染细胞内激活。现在，我们将检查这是否可以选择性地引起HIV感染细胞的凋亡。