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Comprehensive analysis of T-cell receptor ligand by using pHLA multimer library

利用pHLA多聚体库综合分析T细胞受体配体

基本信息

批准号：
21K18257
负责人：
鳥越俊彦
金额：
$ 16.64万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

（１）pHLA multimerライブラリ－の合成と性能評価HLA-A*2402に結合するEBV, CMV, Neoantigen等のT細胞エピトープペプチドをモデルとして、ペプチド・HLA複合体マルチマーライブラリー(pHLA multimerライブラリ－)の合成を実施した。今回は、in vitro translation法は用いずに、Empty HLA multimerと合成ペプチドを混合する方法によってpHLA multimerライブラリーの合成を実施した。抗原ペプチドのアミノ酸配列情報と紐付けされたbarcode DNAを結合したpHLA multimerを合成し、数種類の抗原特異的Ｔ細胞クローンを様々な比率で混合したT細胞プールと反応させた。pHLA multimerの結合したT細胞をフローサイトメーターによってSortingし、barcode DNAのシークエンス解析によってT細胞に結合したpHLA multimerの種類と結合数を定性・定量分析した。この結果、抗原特異的TCRをもつT細胞の同定と定量化に成功した。（２）ヒト腫瘍浸潤T細胞を用いたTCR解析ヒトメラノーマ組織から腫瘍浸潤T細胞を分離し、これら腫瘍浸潤T細胞を対象に、メラノーマ抗原pHLA multimerライブラリー（蛍光標識）と反応させ、pHLA multimerの結合したT細胞をフローサイトメーターによってSortingした。メラノーマ抗原MART-1に特異的なTCRをもつT細胞の検出と定量化に成功した。さらに、これら抗原特異的T細胞のシングルセルTCR遺伝子解析を実施した。腫瘍浸潤T細胞のシングルセルTCR遺伝子解析によって、TCRa鎖、b鎖のレパートワーを詳細に分析することが可能となった。

(1) Synthesis and Performance Evaluation of pHLA Multimer-Synthesis and Performance Evaluation of HLA-A *2402 Binding to EBV, CMV, Neoantigen, etc. Now, in vitro translation method, Empty HLA multi-mer synthesis method is used to implement pHLA multi-mer synthesis. Antigen binding to barcodes DNA, synthesis of pHLA multiplexers, and ratio of antigen-specific T cell binding to antigen-specific T cell binding The binding of pHLA multimer to T cells was analyzed qualitatively and quantitatively. Results: Antigen-specific TCR was successfully quantified and identified. (2) TCR analysis and Sorting of tumor infiltrating T cells. TCR analysis and sorting of tumor infiltrating T cells. TCR analysis and sorting of tumor infiltrating T cells. The detection and quantification of MART-1 specific TCR T cells were successful. In addition, antigen-specific T cell analysis was performed. TCR gene analysis of tumor infiltrating T cells