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免疫細胞の分化と増殖における哺乳類ポリコーム群の機能発現機序

哺乳动物多梳群在免疫细胞分化和增殖中的功能机制

基本信息

批准号：
12051205
负责人：
古関明彦
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12051205/
关键词：
ポリコーム群クロマチンスプライセオソーム Hox Mel18 Bmi1 Th2

项目摘要

ショウジョウバエ・ポリコーム遺伝子群であるMel-18とBmi-1遺伝子産物の機能を分子レベルで明確にしていくことが,本研究の目的であり、それらの作用機序について以下のように解析を行った。(1)HoxクラスターにおけるMel-18結合領域同定の試み。染色体上のMel-18結合領域を明らかにするために、クロマチンDNAとMel-18の複合体の免疫共沈を試みた。パラフォルムアルデヒドを用いて、マウス11.5日胚を固定し、超音波処理によりクロマチンDNA/Mel-18複合体を可溶化した。約1kBの断片として可溶化する条件を明らかにした。セシウム濃度勾配を用いて、フリーのタンパク、クロマチンDNA/タンパク複合体、フリーのクロマチンDNAを分画したところ、Mel-18とBmi-1とBmi-1遺伝子産物は、クロマチンDNA/タンパク複合体の分画にのみ存在することが明らかになった。これとは対照的に、Mel-18とBmi-1のインターラクターであるRing1Bは、クロマチンに結合している分画だけではなく、結合していない分画にも含まれることが明らかになった。Ring1Bも、Hoxクラスターの転写制御に寄与することを明らかにしているので、クロマチン結合型のRing1Bが、Mel-18とBmi-1と複合体を構成してポリコーム複合体として機能することが示唆された。Mel-18と免疫共沈されてくるクロマチンDNAに含まれるHoxクラスターの頻度をHoxb7/b8/b9に焦点を絞って系統的に検索している。(2)155kDaスプライセオソーム結合タンパク(SAP155)によるポリコーム複合体機能の調節Mel-18とRing1Bのインターラクターとして同定したSAP155は、マウス胚においても構成的にMel-18とRing1Bに結合していることが明らかになった。SAP155を欠損したマウスは、8細胞期におこるコンパクションを維持できず、それ以上に発生は進まない。SAP155とMel-18やMph1二重へテロ接合体では、それぞれのへテロ接合体では観察されないホメオチック変異が中軸骨格系で観察された。また、クロマチン結合分画にもSAP155が見られたことから、一部のSAP155はポリコーム複合体のコンポーネントとしても作用する可能性が示された。(3)Mel-18欠損マウスにおけるTh2細胞分化の低下

The purpose of this study is to clarify the molecular function of Mel-18 and Bmi-1 gene products. (1) Mel-18 Hox test for field identity. The binding domain of Mel-18 on chromosome was detected by immunoprecipitation of DNA and Mel-18 complex. The DNA/Mel-18 complex was solubilized by ultrasonic treatment. About 1kB and the conditions for dissolution are clear. In addition, the concentration of Bmi-18, Bmi-1 and Bmi-1 gene products can be adjusted to different concentrations, such as Bmi-18, Bmi-1 and Bmi-1 gene products. The Mel-18 and Bmi-1 are the only ones that can be used in conjunction with each other. Ring 1B, Mel-18 and Bmi-1 complexes are composed of complex components and functional components. Mel-18 and co-immunoprecipitation include Hox DNA, Hoxb7/b8/b9, and Hox DNA. (2)155kDa protein binding protein (SAP155) binding protein complex function regulation of Mel-18 and Ring1B protein binding protein (SAP155) binding protein complex function regulation of Mel-18 and Ring1B protein binding protein (SAP155) binding protein. SAP155 is a failure to develop in the 8-cell stage. SAP155, Mel-18, Mph1, and Mph1 are two different types of heterozygotes. The possibility that SAP155 can be used in combination with SAP155 is demonstrated. (3)Mel-18 is deficient in Th2 cell differentiation.