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ポリコーム群が構成する核内機能ドメインの機能発現機序

多梳基团组成的核功能域的功能表达机制

基本信息

批准号：
12206020
负责人：
古関明彦
金额：
--
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206020/
关键词：
ポリコーム群クロマチンスプライセオソーム Hox Mel18 Bmi1 Mph2

项目摘要

ショウジョウバエ・ポリコーム遺伝子群であるMel-18とBmi-1遺伝子産物の機能を分子レベルで明確にしていくことが,本研究の目的であり、それらの作用機序について以下のように解析を行った。(1)HoxクラスターにおけるMel-18結合領域同定の試み。染色体上のMel-18結合領域を明らかにするために、クロマチンDNAとMel-18の複合体の免疫共沈を試みた。パラフォルムアルデヒドを用いて、マウス11.5日胚を固定し、超音波処理によりクロマチンDNA/Mel-18複合体を可溶化した。約1kBの断片として可溶化する条件を明らかにした。セシウム濃度勾配を用いて、フリーのタンパク、クロマチンDNA/タンパク複合体、フリーのクロマチンDNAを分画したところ、Mel-18とBmi-1とBmi-1遺伝子産物は、クロマチンDNA/タンパク複合体の分画にのみ存在することが明らかになった。これとは対照的に、Mel-18とBmi-1のインターラクターであるRing1Bは、クロマチンに結合している分画だけではなく、結合していない分画にも含まれることが明らかになった。Ring1Bも、Hoxクラスターの転写制御に寄与することを明らかにしているので、クロマチン結合型のRing1Bが、Mel-18とBmi-1と複合体を構成してポリコーム複合体として機能することが示唆された。Mel-18と免疫共沈されてくるクロマチンDNAに含まれるHoxクラスターの頻度をHoxb7/b8/b9に焦点を絞って系統的に検索している。(2)155kDaスプライセオソーム結合タンパク(SAP155)によるポリコーム複合体機能の調節Mel-18とRing1Bのインターラクターとして同定したSAP155は、マウス胚においても構成的にMel-18とRing1Bに結合していることが明らかになった。SAP155を欠損したマウスは、8細胞期におこるコンパクションを維持できず、それ以上に発生は進まない。SAP155とMel-18やMph1二重へテロ接合体では、それぞれのへテロ接合体では観察されないホメオチック変異が中軸骨格系で観察された。また、クロマチン結合分画にもSAP155が見られたことから、一部のSAP155はポリコーム複合体のコンポーネントとしても作用する可能性が示された。(3)Mph2のノックアウトマウスの作製Mel-18結合タンパクであるMph2を欠損するマウスを作成し、Mel-18と類似した表現型を骨格において示すことを明らかにした。

In this study, the purpose of this study is to analyze the sequence of action mechanisms in order to analyze the sequence of action mechanisms in this study. In this study, the molecular mechanism of Mel-18 Bmi-1 in the subgroup was analyzed in the following order. (1) the combination of the field and the definition of Hox information is the same as that of the Mel-18. On the chromosome, Mel-18 was combined with field DNA DNA Mel-18 complex immunoprecipitation test. The embryos were fixed for 11.5 days, and the DNA/Mel-18 complex was dissolved by ultrasound. The 1kB fragments are soluble and the conditions are clear. In this case, you will need to know that there is a lot of information about the presence of a complex, such as DNA/, DNA, Mel-18, Bmi-1, Bmi-1, and so on. The pictures were taken, the Mel-18 Bmi-1 pictures were taken, the pictures were taken, the pictures were drawn, and the pictures were drawn. The combination of Ring1B, Hox, and Mel-18 Bmi-1 can be used to express the information of the computer. The combination of the device, the Bmi-1, and the device can be used to make a copy. Mel-18 co-immunoprecipitation (Mel-18) immunoprecipitation assay (DNA) contains Hox immunoassay (Hoxb7/b8/b9), which is the focus of the immune system. (2) the combination of 155kDa Ring1B and SAP155 can be used to verify that the Mel-18 Ring1B that is the same as that of SAP155, which is the same as that of Mel-18, can be used in combination with the combination of Mel-18 and Ring1B. SAP155 is responsible for the maintenance of health care in the first half of the year, and in the first half of the year. SAP155, Mel-18, Mph1, double bond, joint, bone, bone and bone. The combination of the two parts shows that there is a SAP155 picture, and that a SAP155 complex shows the possibility of the effect. (3) the combination of the Mel-18 and the Mph2 data shows that the Mph2 is not valid, and the Mel-18 type is similar to that of the table.