脊椎形成を統御する転写活性化因子Pax-1遺伝子の発現調節機構

控制椎骨形成的转录激活因子 Pax-1 基因表达的调节

• 批准号: 06770005
• 负责人: 古関 明彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770005/
• 关键词: 脊椎形成; ウズラPax-1; スクレロトーム分化; 脊索; モノクローナル抗体

本研究は、転写因子であるPax-1の脊椎形成過程における役割を明らかにしていくことを目標とする。マウスPax-1 Paired box部分をブローブとし、ウズラ4日胚cDNAライブラリーより、ウズラPax-1を単離した。単離した1500塩基対よりなるクロンQP1は、353アミノ酸からなるオープンリーディングフレームを有し、Paired box内のアミノ酸配列は、マウス、またはヒトと100%同一であった。全長cDNAを用いたin situハイブリダイゼーションは、QPax-1が、まず傍軸中胚葉が、上皮性体節に分化したとき、その内腹側2/3で発現することを示した。その後、その細胞はスクレロトームへと分化し、Pax-1を発現する細胞は、脊索周辺にperichorolal tubeといわれる構造を形成することが明らかとなった。Pax-1の発現の必要条件を解析するために、未分化の傍軸中胚葉のin vitroでの培養を行った。単独での培養では、分化は上皮性体節の段階で止まり、Pax-1の発現も見られなかったが、脊索との共培養により、Pax-1を発現するスクレロトーム細胞を誘導しえた。このことにより、Pax-1の発現が脊索からのシグナルに依存していることを直接証明した。Pax-1に対するモノクローナル抗体を作製した。Pax-1ペアドボックスを含まない600塩基対からなる断片を、GST(グルタチオン-トランスフェレース)の発現ベクターに導入し、GSTとの融合タンパクを大腸菌より大量に精製した。この融合タンパクをマウスに免疫し、マウスミエローマ細胞P3U1と細胞融合し、3種類のハイブリドーマを得た。これらは、ウェスタンブロッティングと免疫沈降法を用いてウズラPax-1タンパクを特異的に認識することを明らかにした。現在、この抗体を用いて、Pax-1下流遺伝子の単離を試みている。

In this study, the factors affecting the formation of Pax-1 vertebrae were analyzed. In the Pax-1 Paired box section, the 4-day embryo is cDNA, the Pax-1 is isolated, and the 4-day embryo is isolated. In addition, there are some problems in the Paired box, such as QP1, Paired box, acid, acid and acid. The full-length cDNA was displayed with the following tools: in situ, QPax-1, mesoderm, epithelia, epigastrium, inner abdomen, and so on. After the injury, the cells were differentiated, the Pax-1 cells were detected, and the notochordal periphery was formed. The notochordal tissue was formed. The necessary conditions for the realization of Pax-1 were analyzed, and the undifferentiated mesoderm was cultured near the mesoderm (in vitro). The differentiation of the epithelial sex body segment, the Pax-1, the notochord, and the Pax-1 showed that the epithelial cells were isolated, differentiated, differentiated and differentiated. The notochord, the dependency, the notochord, the no The Pax-1 antibody was used as an antiserum. The Pax-1 gene contains the fragments, the GST, the fusion and the large number of spermatozoa in the GST. The fusion products were immunized, the P3U1 cells were fused, and the cells were successfully fused. The method of immunoprecipitation was used to tell the truth that the Pax-1 had a special knowledge of the disease. At present, the use of anti-virus antibodies, the use of low-grade antibodies, the use of anti-virus antibodies, the use of antibodies, and the use of indecent antibodies.