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哺乳類ポリコーム群による細胞増殖と細胞死制御機序の解明

哺乳动物Polycomb小组阐明细胞增殖和细胞死亡控制机制

基本信息

批准号：
12215017
负责人：
古関明彦
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215017/
关键词：
ポリコーム群クロマチンスプライセオソーム Hox Mel18 Bmi1

项目摘要

ショウジョウバエ・ポリコーム遺伝子群であるMel-18とBmi-1遺伝子産物の機能を分子レベルで明確にしていくことが,本研究の目的であり、それらの作用機序について以下のように解析を行った。(1)HoxクラスターにおけるMel-18結合領域同定の試み。染色体上のMel-18結合領域を明らかにするために、クロマチンDNAとMel-18の複合体の免疫共沈を試みた。パラフォルムアルデヒドを用いて、マウス11.5日胚を固定し、超音波処理によりクロマチンDNA/Mel-18複合体を可溶化した。約1kBの断片として可溶化する条件を明らかにした。セシウム濃度勾配を用いて、フリーのタンパク、クロマチンDNA/タンパク複合体、フリーのクロマチンDNAを分画したところ、Mel-18とBmi-1とBmi-1遺伝子産物は、クロマチンDNA/タンパク複合体の分画にのみ存在することが明らかになった。これとは対照的に、Mel-18とBmi-1のインターラクターであるRing1Bは、クロマチンに結合している分画だけではなく、結合していない分画にも含まれることが明らかになった。Ring1Bも、Hoxクラスタ-の転写制御に寄与することを明らかにしているので、クロマチン結合型のRing1Bが、Mel-18とBmi-1と複合体を構成してポリコーム複合体として機能することが示唆された。Mel-18と免疫共沈されてくるクロマチンDNAに含まれるHoxクラスタ-の頻度をHoxb7/b8/b9に焦点を絞って系統的に検索している。(2)155kDaスプライセオソーム結合タンパク(SAP155)によるポリコーム複合体機能の調節Mel-18とRing1Bのインターラクターとして同定したSAP155は、マウス胚においても構成的にMel-18とRing1Bに結合していることが明らかになった。SAP155を欠損したマウスは、8細胞期におこるコンパクションを維持できず、それ以上に発生は進まない。SAP155とMel-18やMph1二重ヘテロ接合体では、それぞれのヘテロ接合体では観察されないホメオチック変異が中軸骨格系で観察された。また、クロマチン結合分画にもSAP155が見られたことから、一部のSAP155はポリコーム複合体のコンポーネントとしても作用する可能性が示された。

ショウジョウバエ・ポリコーム弝子组であるMel-18とBmi-1缝子product のfunctional をmolecule レベルIt is clear that the purpose of this study is to clarify the mechanism of action and the sequence of action of this study. The following analysis is performed. (1)HoxククラスターにおけるMel-18 combines the same field of determination. The binding area of Mel-18 on the chromosome is clear and the immune co-precipitation test of Mel-18 complex in DNA and DNA is done. The パラフォルムアルデヒドを was fixed with いて, マウス11.5 day embryo, and the ultrasonic treatment was used to solubilize the DNA/Mel-18 complex. Approximately 1kB of the fragment is soluble and the condition is clear. The concentration of セシウム is blended with いて, フリーのタンパク, クロマチンDNA M The el-18 and Bmi-1 and Bmi-1 legacy products are the same as those of the クロマチンDNA/タンパク complex.これとは対之に、Mel-18とBmi-1のインターラクターであるRing1Bは、クロマチンに合している分画だけではなく, Combined していない分画にも恾れることが明らかになった. Ring 1Bも、Hoxクラスタ-の転书淫发 and することを明らかにしているので、クロマチンcombination typeのRi The ng1B, Mel-18 and Bmi-1 complexes are composed of the same complex and functional components. Mel-18 immune co-precipitation DNA DNA containing Hox クラスタ-のfrequencyをHoxb7/b8/b9にfocusをtwistingってsystem'sに検SOしている. (2) 155kDa スプライセオソーム combined with タンパク (SAP155) によるポリコーム complex function adjustment Mel-18とRing1Bのインターラクターとして Same as したSAP155は, マウスEmbryonic においてもThe にMel-18とRing1B is combined with the していることが明らかになった. SAP155 したマウスは, 8-cell stage におこるコンパクションを maintenance できず, and それ and above に発生は enter まない. SAP155とMel-18やMph1 double ヘテロ joint body では、それぞれのThe ヘテロ joint body では観看されないホメオチック変different がaxial bone grid system で観看された.また、クロマチン Combined painting にもSAP155が见られたことから、一一SAP 155 はポリコーム Complex のコンポーネントとしても Effect するPossibility が Show された.