哺乳類卵子のゲノム情報と初期化

哺乳动物卵的基因组信息和初始化

• 批准号: 12202029
• 负责人: 竹家 達夫
• 金额: --
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12202029/
• 关键词: 卵子; 遺伝子; クロマチン; 再編成; 初期化

「背景と目的」本研究は、比較的量に恵まれまたin vitro maturation(IVM)やin vitro fertilization(IVF)の技術が確立されているブタ卵子をおもな材料として、1)哺乳類卵子で発現する遺伝子ならびに胚生ゲノム成立の過程で働く遺伝子を網羅的に解析する、2)特に、初期化との関連で、前核形成時のクロマチンの脱凝縮過程/再編成機構に注目し、独自に作成したブタ卵cDNAライブラリーを用いて関連遺伝子を探索するとともに、それらの産物の機能解析を行い、胚性ゲノム成立機構との関連を調べる。これらの解析を通して、生殖・初期発生を担う卵子ゲノム情報の実体と動態を把握し、「初期化」を理解する手がかりを得る。さらに、以上の研究と併行して、高感度簡易遺伝子発現解析法を開発し、材料面から予想される量的な問題点を克服する手立てとする。「検討結果」1)DNAチップ解析法において、従来のcDNAプローブに替わる新規の標識法を開発し特許を申請した。2)ブタ卵子cDNAライブラリーの作成:量的ならびに技術的な問題をクリアーし、ブタ卵母細胞cDNAライブラリーを作成することが出来た。インサートサイズ、独立クローン数、卵特異的な遺伝子クローンの存在を各々検定・確認した。3)脱凝縮活性/反応測定系:ブタ精子を用いたクロマチン脱凝縮反応測定系を構築した。4)哺乳類脱凝縮因子の探索:上記ライブラリーから、新規脱凝縮因子関連遺伝子をクローニングした。現在組み換え蛋白質の発現の至適化と精製を進めている。「考察」1)新規の遺伝子解析法に用いる蛍光色素を共同研究により開発し、より高感度の方法へと進展を図りたい。2)新たにクローニングした脱凝縮因子遺伝子産物と上記脱凝縮反応系を利用した機能解析へと進む。3)卵およびサブトラクションcDNAライブラリーを材料にして、遺伝子の網羅的解析に着手したい。

Background and Objective: This study aims to establish and compare the techniques used in vitro maturation(IVM) and in vitro fertilization(IVF). 1) Mammalian egg development and embryogenesis; 2) Specialization and initiation; and 3) Analysis of the relationship between IVF and embryo development. The de-condensation process/reassembly mechanism during pronucleus formation is focused on, independently produced, and used to explore the functional analysis of the products, and the relationship between the embryonic structure and the formation mechanism is adjusted. The analysis, reproduction and initial development of eggs are important for understanding the dynamics of the body and the initial stage. In addition, the above research and parallel, high-sensitivity simple particle detection analysis method to develop, material surface to consider the amount of problems to overcome the establishment of "Results of the study" 1) Application for a new method for identification of DNA fragments by cDNA analysis 2) Preparation of oocyte cDNA: There are both quantitative and technical problems in preparing oocyte cDNA. The number of independent documents, the existence of unique documents, and the number of independent documents are determined and confirmed. 3)Decondensation Activity/Reactivity Assay System: Construction of Decondensation Reactivity Assay System for Sperm 4)Exploration of mammalian decondensing factors: a new decondensing factor-related gene Now, the protein production and purification are improved. "Investigation" 1) The new method of molecular analysis is based on the common research of photochrome, the development of high sensitivity method and the progress of high sensitivity method. 2)The new de-condensing factor gene product is used to analyze the function of de-condensing reaction system. 3)The analysis of the DNA sequence of the DNA sequence was carried out.

项目成果

E.Meiyanto,N.Ishida and T.Takeya: "Application of fluorescently labeled poly (dU) probe for gene expression profiling on cDNA microarrays"BioTechniques. (印刷中). (2001)

E. Meiyanto、N. Ishida 和 T. Takeya：“荧光标记聚 (dU) 探针在 cDNA 微阵列上进行基因表达分析的应用”（出版中）。