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ゲノム再編成の制御機構

基因组重排的控制机制

基本信息

批准号：
12206025
负责人：
名川文清
金额：
--
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、抗原受容体多重遺伝子座におけるゲノムの構築原理を明らかにすることを目指し、組み換えシグナル配列の3'末端リン酸化について主に解析した。V(D)J組み換えは、進化の過程で挿入されたトランスポゾンの切り出し反応を利用したものと考えられており、実際in vitroでは、切断を受けた組み換えシグナル配列(RSS)がRAGタンパク質と結合した、いわゆるsignal end(SE)complexにトランスポジション活性のあることが知られている。しかしながら、in vivoでSE complexの転座が生じるとすれば、組み換えの度毎に挿入変異が引き起こされる事になり、生体にとっては極めて有害である。我々は、切断されたRSS、即ちSE DNAの3'-OH末端がRAGタンパク質によりリン酸化されること、更にこのリン酸化がSE complexのトランスポジションをin vivoで抑制する積極的メカニズムとして機能している可能性を提唱してきた。本研究では、まず、この新規なDNAの3'-OH末端リン酸化の反応機構について詳細に解析し、周辺にある核酸の切断端またはnickの位置に見られる3'-リン酸基が、trans-esterificationによりSE DNAの3'-OH端に転移する事を明らかにした。我々は更に、この3'リン酸化がin vivoにおいても生じているかどうかを検討した。3'末端リン基を検出する新しい方法を考案し、マウス新生仔胸腺のT細胞受容体遺伝子Dδ2のRSS切断端をLM-PCRを用いて調べたところ、実際SEの3'-OH端がリン酸化されていることが明らかとなった。これらの研究成果は、V(D)J組み換えがトランスポジション反応を利用しつつ、同時にSE complexの転座は抑制するという、いわば両刃の刃の一方を封じ込める様に機能していることを示すものであり、抗原受容体遺伝子座のゲノム進化を考える上で重要な知見を与えるものである。

This study aims to clarify the construction principles of multiple antigen receptor loci and analyze the main factors involved in the 3'terminal acidification of the complex ligand arrangement. V(D) J-group transition, evolution process, into the transition, out of the transition, out of the transition, into the transition, actually in vitro, into the transition, out of the transition, out of the transition, out of In vivo, the SE complex is very harmful. We also propose the possibility of inhibiting in vivo the positive response of RSS, i.e., the 3'-OH terminus of SE DNA, from RAG to RNA. In this study, we analyzed in detail the mechanism of reverse acidification of the 3'-OH terminal of DNA, the position of the nick at the end of the cleavage, and the position of the 3'-OH terminal of DNA. I'm going to change my mind, and I'm going to change my mind. A new method for detecting the 3'-terminal subunit of T cell receptor DNA was developed. The 3'-terminal subunit of T cell receptor DNA was amplified by LM-PCR. The results of this study are as follows: V(D)J group is the most important part of the study on the evolution of antigen receptor, and the use of SE complex is the most important part of the study.