ゲノム再編成の制御機構

基因组重排的控制机制

• 批准号: 13206017
• 负责人: 名川 文清
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206017/
• 关键词: V(D)J組み換え; 抗原受容体遺伝; トランスポゾン; RAG; リン酸化

V(D)J組み換えは、脊椎動物の進化の過程で抗原受容体遺伝子に偶然挿入されたトランスポゾンの切り出し反応を利用したものと考えられており、実際組換え酵素であるRAGタンパク質によって切り出されたsignal-end(SE)がin vitroではトランスポーズすることが知られている。我々は、SEDNAの3'-OH端が、RAGタンパクと形成するSE complex中でリン酸化されていることを最近発見した。このリン酸化は切断後のSEがトランスポーズするのを阻害する。本研究では、この3'-リン酸化の反応機構を明らかにすることを目指しin vitroで解析を進めた。その結果、3'突出末端を持つ二本鎖DNAが基質となってss/ds junctionが切断され、その3'端に生じたリン酸基がSEDNAの3'-OH端に転移することが判明した。3'リン酸基を持つドナーDNAは、そのリン酸基によってSE complexに特異的に取り込まれていることがDNaseIフットプリント法により確認され、転移反応の結果リン酸基を失い3'-OHとなったドナーDNAは、SE complexからすみやかに解離することが明らかとなった。さらに、ドナーDNAの取り込みにRAG1タンパク質が重要な役割を果たしていることが、変異体を用いた解析から明らかとなった。in vivoでは、hairpin開裂後のコーディング末端に3'-突出構造が見られ、実際の組み換えではプロセスされたコーディング末端(CE)がリン酸基のドナーとなっている可能性が高いと考えられる。従って、我々が見いだした31リン酸基転移反応は、一方では挿入変異の原因となるSEのトランスポジションを抑止し、もう一方ではヘアピンの開裂、プロセスによってCEに生じた3'リン酸基を取り除いてligationを可能にするという、極めて重要な役割を果たしている可能性がある。

V (D) J tissue test, vertebrate animal evolution process antigen acceptor gene was accidentally introduced into the immune system, and the antigen acceptor was accidentally cut out of the antigen. The enzyme was used to detect the antigen signal-end (SE), the in vitro antigen, the antigen receptor, the antigen, the antigen. We, SEDNA, 3'-OH, and RAG, formed the acidizing, acidifying, aci After the acidizing was cut off, the SE was cut off and the damage was blocked. In this study, it is clear that the anti-acidizing mechanism refers to the improvement of in vitro analysis. The results showed that the end of the 3 'protruding DNA was cut off by the ss/ds junction of the ordinary university, and the acid group was generated at the 3' end of the 3'-OH. The 3'-OH end was moved to identify the disease. 3. The acid base is sensitive to DNA, DNaseI, DNaseI, and DNA. The results show that the acid base is missing, the acid base is missing, the acid group is DNA, and the acid base is missing. Please use the DNA to pick up the key RAG1, to cut the fruit and to parse the information. After the cracking of in vivo and hairpin, there is a high probability that the end of the terminal (CE) will not be affected. In the first place, we do not know that the acid base is not valid, and that one party is responsible for the reason. The reason is that the SE is causing serious damage, and that the other party is responsible for the failure of the CE. In addition, it is very important to remove the acid base of the ligation, which is very important.

项目成果

Kodama, M. et al.: "The PU.1 and NF-EM5 binding motifs in the Ig 3' enhancer are responsible for directing somatic hypermutations to the intrinsic hotspots in the transgenic Vk gene"International Immunology. 13. 1415-1422 (2001)

Kodama, M. 等人：“Ig 3 增强子中的 PU.1 和 NF-EM5 结合基序负责将体细胞超突变引导至转基因 Vk 基因的内在热点”国际免疫学。