ゲノム再編成の制御機構

基因组重排的控制机制

• 批准号: 13206017
• 负责人: 名川 文清
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206017/
• 关键词: V(D)J組み換え; 抗原受容体遺伝; トランスポゾン; RAG; リン酸化

V(D)J組み換えは、脊椎動物の進化の過程で抗原受容体遺伝子に偶然挿入されたトランスポゾンの切り出し反応を利用したものと考えられており、実際組換え酵素であるRAGタンパク質によって切り出されたsignal-end(SE)がin vitroではトランスポーズすることが知られている。我々は、SEDNAの3'-OH端が、RAGタンパクと形成するSE complex中でリン酸化されていることを最近発見した。このリン酸化は切断後のSEがトランスポーズするのを阻害する。本研究では、この3'-リン酸化の反応機構を明らかにすることを目指しin vitroで解析を進めた。その結果、3'突出末端を持つ二本鎖DNAが基質となってss/ds junctionが切断され、その3'端に生じたリン酸基がSEDNAの3'-OH端に転移することが判明した。3'リン酸基を持つドナーDNAは、そのリン酸基によってSE complexに特異的に取り込まれていることがDNaseIフットプリント法により確認され、転移反応の結果リン酸基を失い3'-OHとなったドナーDNAは、SE complexからすみやかに解離することが明らかとなった。さらに、ドナーDNAの取り込みにRAG1タンパク質が重要な役割を果たしていることが、変異体を用いた解析から明らかとなった。in vivoでは、hairpin開裂後のコーディング末端に3'-突出構造が見られ、実際の組み換えではプロセスされたコーディング末端(CE)がリン酸基のドナーとなっている可能性が高いと考えられる。従って、我々が見いだした31リン酸基転移反応は、一方では挿入変異の原因となるSEのトランスポジションを抑止し、もう一方ではヘアピンの開裂、プロセスによってCEに生じた3'リン酸基を取り除いてligationを可能にするという、極めて重要な役割を果たしている可能性がある。

V(D) Group J: In the evolution of vertebrates, antigen receptor genes are accidentally inserted into the signal end (SE) of the protein, and the signal end (SE) of the protein is extracted from the protein. The 3'-OH terminal of SEDNA and RAG have recently been discovered in SE complex. After the acid is cut off, it will be blocked. This study is aimed at analyzing the mechanism of 3-D acidification. As a result, it was found that the 3'protruding end of the DNA was separated from the ss/ds junction, and the 3' terminal of the DNA was separated from the 3'-OH terminal of the DNA. 3'-OH-3'-4 '-OH-4' In addition to the above, the DNA of the target group is extracted from the RAG1 and analyzed in detail. In vivo, after hairpin cracking, the terminal 3'-protruding structure is found, and the actual composition is changed. The terminal (CE) of the acid group is highly probable. The reason for the change in the acid group is to suppress the change in the acid group, and the possibility of the change in the acid group is to prevent the change in the acid group.

项目成果

Kodama, M. et al.: "The PU.1 and NF-EM5 binding motifs in the Ig 3' enhancer are responsible for directing somatic hypermutations to the intrinsic hotspots in the transgenic Vk gene"International Immunology. 13. 1415-1422 (2001)

Kodama, M. 等人：“Ig 3 增强子中的 PU.1 和 NF-EM5 结合基序负责将体细胞超突变引导至转基因 Vk 基因的内在热点”国际免疫学。