獲得免疫系起源の研究

获得性免疫系统起源的研究

基本信息

批准号：
20017005
负责人：
名川文清
金额：
$ 5.38万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題では、VLR遺伝子再編成がどの様に制御されているかについて調べるため、ヌタウナギのVLR遺伝子(VLR_A及びVLR_B)の再編成をsingle-cell PCRを用いて解析した。その結果、VLR遺伝子は、両方のalleleで再編成を起こすことが可能であること、また、遺伝子再編成によりdefectiveなVLR遺伝子が出来上がる場合があること、functionalな再編成が起こったときには更に再編成が起こらないようにするフィードバック制御が働いていることが示唆された。defectiveな遺伝子がたまたま作り上げられてしまったときには、もう一方のalleleでもう一度再編成を行っている可能性がある。また、ヌタウナギのゲノムの配列を明らかにするために、シークエンスキャプチャー法(Roche Diagnostics)を用いて、germline LRR遺伝子セグメント(VLR_A及びVLR_B合わせて推定約千種、aileleを区別すると2千種)の配列を濃縮し、それらの配列を明らかにすることを試みた。single-cell PCR解析で得られた、多数の再編成後のVLR遺伝子の配列を基に、キャプチャー用アレイを設計・作製し、これを用いてヌタウナギのgermline LRR遺伝子セグメントを濃縮した。用いたヌタウナギのゲノムDNAは上記のSingle-cell PCRで用いたものと同じ個体から抽出したものである。シークエンスキャプチャーによりgermline LRR遺伝子セグメントを約1000倍に濃縮した。キャプチャーされたDNAの配列を決定した。

在此研究主题中，我们使用单细胞PCR分析了兔鳗中VLR基因（VLR_A和VLR_B）的重排，以研究如何调节VLR基因。结果表明，VLR基因可以在两个等位基因中重新排列，遗传重排可能导致VLR基因有缺陷，并且反馈控制正在起作用，以防止在发生功能重排时进一步重排。如果碰巧创建了一个有缺陷的基因，则可能会再次重组另一个等位基因。此外，为了阐明兔鳗的基因组的序列，我们试图丰富种系LRR基因段的序列（VLR_A和VLR_B组合在一起，以揭示大约成千上万种的序列，并使用序列捕获方法（ROCHE诊断）来揭示大约2,000种物种的序列，并区分ailele ailele）。基于通过单细胞PCR分析获得的许多重新排列的VLR基因的序列，设计和制备了捕获阵列，并使用此序列富集了兔鳗的生殖线LRR基因段。从上面的单细胞PCR中使用的兔鳗的基因组DNA从相同的个体中提取。通过测序捕获，将种系LRR基因段富集了大约1000次。测序捕获的DNA。