CDK5結合性新規細胞質型チロシンキナーゼの脳形成における役割

CDK5结合新型细胞质酪氨酸激酶在脑形成中的作用

• 批准号: 12210122
• 负责人: 久永 真市
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210122/
• 关键词: 神経; 脳形成; CDK5; reelin; p35; シグナル伝達

脳形成における最も重要なプロセスの一つは、分化した神経細胞がそれぞれの決められた位置へと移動し、目標細胞へ軸索を正確に伸長させることである。神経細胞の位置決定と神経突起伸長の両方で機能しているのがCDK5(サイクリン依存性キナーゼ5)である。位置決定については、神経細胞が位置情報を認識してからCDK5を活性化するまでの情報伝達系が存在しているはずである。神経細胞の層形成が異常な変異マウスの研究から、reelin(細胞外分泌蛋白)やmDab1(細胞内アダプター蛋白)がそのような因子として見つかっている。しかし、その経路については、CDK5の前後を含めて未同定の因子が多い。申請者らはCDK5の活性制御機構を解析するため、CDK5またはその活性化サブユニットp35と結合する蛋白をヒト胎児脳のcDNAライブラリーから酵母のtwo hybrid法を用いて検索し、p35に結合する新規の細胞質型チロシンキナーゼ(p35BTK)を分離した。本研究では、新規チロシンキナーゼとp35の結合について、培養細胞内および、脳抽出液を用いて検討した。p35BTKをp35/CDK5と293細胞にトランスフェクションしたとき、CDK5が存在すると分解がみられた。この分解はp35BTKがCDK5によりリン酸化され、プロテアソームによって分解されたものであった。分解をプロテアソーム阻害剤で抑えた時、p35BTKとp35/CDK5の結合がみられた。GST-p35BTKビーズを作成し、ラット脳抽出液ちインキュベーションしたとき、p35/CDK5の特異的な結合がみられた。

In order to form the most important information system, the most important thing is to make sure that the location of the cell is not changed, and that the target is properly extended. The location of the neuron determines the neurite protuberance and elongation of the brain. The machine is capable of generating CDK5 (dependence of the brain 5). The location determines the location, the location The formation of supernatant cells is characterized by the study of exocrine proteins, reelin (extracellular secretory proteins), mDab1 (intracellular proteins), cytokines, factors. There are many factors in the front and back of the CDK5, including the undetermined factors. The applicant used the CDK5 activity control machine to analyze the enzyme, the CDK5 enzyme to activate the enzyme, the p35 to combine the protein, the cDNA, the yeast, the yeast, the two hybrid, the claim, the p35, and the new regulation, cell-specific, cell-specific, cell-linked DNA (p35BTK) to separate the DNA. In this study, new rules and regulations were used to detect the expression of p35 in combination with the culture of intracellular lipids and extractions. P35BTK, p35/CDK5, 293, cell, cell Decompose p35BTK, CDK5, acidify, decompose, decompose, acid, acid, acidify, acid, acid, acid, When decomposing the p35/CDK5 to prevent the damage and reduce the damage, the p35BTK and the combination of the two methods are used. The combination of GST-p35BTK and p35/CDK5 was made, the extraction fluid was extracted, the liquid was extracted, and the combination was made.

项目成果

Tokuoka,H.: "BDNF-induced phosphorylation of neurofilament-H subunit in primary culture of rat cortical neurons."J.Cell Sci.. 113. 1059-1068 (2000)

Tokuoka, H.：“大鼠皮质神经元原代培养物中 BDNF 诱导的神经丝 H 亚基磷酸化。”J.Cell Sci.. 113. 1059-1068 (2000)

Bibb,J.: "Phosphorylation of protein phosphatase inhibitore-I by Cdk5.J."Biol.Chem.. (in press.).

Bibb,J.：“Cdk5.J. 蛋白磷酸酶抑制剂-I 的磷酸化”Biol.Chem..（出版中）。

Kusakawa,G.: "Calpain-dependent proteolytic cleavage of the p35 CDK5 activtor to p25."J.Biol.Chem.. 275. 17166-17172 (2000)

Kusakawa,G.：“p35 CDK5 激活剂对 p25 的钙蛋白酶依赖性蛋白水解裂解。”J.Biol.Chem.. 275. 17166-17172 (2000)

Kitazawa,H.: "Ser787 in the proline-rich region of human MAP4 is a critical phosphorylation site that reduces the microtubule polymerization activity."Cell Struct.Funct.. 25. 33-39 (2000)

Kitazawa, H.：“人 MAP4 富含脯氨酸区域中的 Ser787 是降低微管聚合活性的关键磷酸化位点。”Cell Struct.Funct.. 25. 33-39 (2000)

Uchida,A.: "The neurofilament of Klotho, the mutant mouse prepaturely displaying symptoms resembling human aging."J.Neurosci.Res.. (in press.).

Uchida,A.：“Klotho 的神经丝，突变小鼠预先表现出类似于人类衰老的症状。”J.Neurosci.Res..（正在出版）。