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脳cdc2関連キナーゼ/cdk5の活性阻害因子の同定と精製

脑CDC2相关激酶/CDK5活性抑制剂的鉴定和纯化

基本信息

批准号：
07680676
负责人：
久永真市
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

cdk5はcdc2関連キナーゼの一つである。他の全てのcdc2関連キナーゼが細胞増殖の進行に関わっているのに対して、cdk5は最終分化し、分裂しない神経細胞で機能していると考えられている。神経細胞内でcdk5がどのような役割をしているのか、また、どのようにして活性化されているかは、非常に重要な問題である。すでに、我々はcdk5キナーゼを精製し、その性質を調べ、神経細胞内におけるcdk5の基質はニューロフィラメントのHサブユニット(NF-H)やタウ蛋白であることなどを明らかにしてきた。今年度の当初の目的はcdk5の活性阻害因子の同定であったが、阻害因子の検出が出来ず、ここではでは、cdk5の局在についての生化学的な検討へと計画を変更して行った。ブタ脳粗抽出液中の細胞骨格を沈殿させると、殆ど全てのcdk5キナーゼ活性は細胞骨格分画に回収された。この画分から微小管を重合・脱重合させ精製するとともに、ニューロフィラメントから分離させると、cdk5活性は微小管と挙動をともにした。再構成微小管と精製cdk5との共沈実験からcdk5は微小管結合蛋白を介さず、直接微小管に結合できることが示された。一方、微小管に結合できない画分にもcdk5蛋白質は検出されたが、ゲルろ過法により、これらはcdk5単独からなる活性を持たないモノマーであることが判った。この結果より、cdk5は微小管にp35またはその分解産物であるp26を介して結合することが示された。cdk5のこのような局在は、神経軸索内で基質であるタウやニューロフィラメントHの近傍に存在して、特定の蛋白を基質として選択する一つの方法と考えられる。

cdk5はcdc2relatedキナーゼの一つである. His full function of cdc2 is related to the progress of cell proliferation and the progress of cell proliferation. cdk5 is responsible for the final differentiation and division of cells and the function of the cells.でcdk5 intracellularlyどのようにしてactivationされているかは、very important issueである.すでに、我々はcdk5キナーゼをRefinedし、その性をadjustedべ、神経 intracellular におけるcdk5のstromaニューロフィラメントのHサブユニット (NF-H) やタウprotein であることなどを明らかにしてきた. The original purpose of this year was to release the active inhibitory factors of cdk5 and the inhibitory factors.ず, ここではでは, cdk5のbureau in についてのbiochemistry's な検 Discussion へと plan を変 Update して行った. The cytoskeletal structure and activity of the cytoskeletal structure and the activity of the cytoskeletal structure in the crude extract were recovered.この画分からMicrotubesをCoincidence・DecouplingさせRefinedするとともに、ニューロフィラメントから Isolation させると, cdk5 activity は microtubule と挙动をともにした. Reconstitute microtubules and purified cdk5 and co-precipitate cdk5 cdk5 microtubule-binding protein and direct microtubule-binding protein. On one side, the combination of microtubules is divided into cdk5 proteins, and the protein is divided into small pieces.より, これらはcdk5単多からなるACTIVE をhold たないモノマーであることがadjusted った.このRESULTSより、cdk5はmicrotubuleにp35またはそのdegradation productであるp26をmediatedしてcombinationすることが Showされた. cdk5's のこのようなbureau in は、神経axonal inner matrix であるタウやニューロフィラメントH の near に existence して, specific の protein を matrix として selection する一つの method とえられる.