マウスホモロガスリコンビナーゼの遺伝子クローニング

小鼠同源重组酶基因克隆

• 批准号: 12877018
• 负责人: 野阪 哲哉
• 金额: --
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877018/
• 关键词: 遺伝子相同組換え; ホモロガスリコンビナーゼ; レトロウイルス発現クローニング

当研究の目的はレトロウイルス発現クローニング法を用いて、マウスにおける遺伝子相同組換え(HR)に関与するホモロガスリコンビナーゼ遺伝子そのもの、またはその活性化遺伝子を単離することである。実験は、まず最初に、targeting vectorが導入されたときにHRを生ずるとNeomycin耐性遺伝子が発現するように細工したNIH3T3細胞由来のレポーター細胞株を樹立し、その細胞にHR活性の高い細胞であるES細胞およびニワトリDT40細胞由来のcDNAをレトロウイルスを用いて各々発現させた。次に、targeting vectorを導入し、しかるべきcDNA存在下で相同組替えを起こしたクローンをG418存在下で単離するという流れで行った。結果はNeo耐性クローンは全く得られず、NIH3T3細胞においては一つの遺伝子の補充だけではHRを生ぜしめることはできないことが判明した。現在、基底レベルのHR活性が比較的高いと思われるCHO細胞を用いて同様の実験を検討している。場合によっては予め、変異原処理によりランダムに遺伝子を破壊しておいてHRが起こらなくした細胞株を用いて、レトロウイルスによる発現クローニング法でその表現型をレスキューする遺伝子を単離するというようなアプローチも必要かもしれないと考えている。2000年度は当実験の目的遺伝子であるホモロガスリコンビナーゼは得られなかったが、レトロウイルス発現クローニング法を用いた一連の研究により、血球細胞の分化や増殖に関与する、マウスおよびヒトMgcRacGAP遺伝子を単離し、同遺伝子が細胞質分裂にも重要な役割を担っていることを見出した。

When the の purpose は レ ト ロ ウ イ ル ス 発 now ク ロ ー ニ ン を グ method using い て, マ ウ ス に お け る heritage 伝 son in the same group え (HR) に masato and す る ホ モ ロ ガ ス リ コ ン ビ ナ ー ゼ heritage 伝 son そ の も の, ま た は そ の activeness heritage 伝 son を 単 from す る こ と で あ る. Experimental, まず initial に, targeting Vector が import さ れ た と き に HR を raw ず る と Neomycin patience heritage 伝 son が 発 now す る よ う に fret し た NIH3T3 cell origin の レ ポ ー タ ー cell lines を し, そ の cells に HR high active の い で あ る ES cells お よ び ニ ワ ト リ DT40 cell origin の cDNA を レ ト ロ ウ イ ル ス Youdaoplaceholder0 is represented by 々 and て respectively させた. に, targeting vector を import し, し か る べ き cDNA で in the presence of the same group for え を up こ し た ク ロ ー ン を G418 presence で 単 from す る と い れ う flow line で っ た. Results は Neo patience ク ロ ー ン は may bring ら く れ ず, NIH3T3 cells に お い て は a つ の posthumous son 伝 の supplement だ け で は HR を raw ぜ し め る こ と は で き な い こ と が.at し た. Now, basal レ ベ ル の HR activity が comparative high い と think わ れ る を CHO cells with い て with others の be 験 を beg し 検 て い る. Occasions に よ っ て は to め, - different original 処 に よ り ラ ン ダ ム に posthumous son 伝 を broken 壊 し て お い て HR が up こ ら な く し た cell lines を with い て, レ ト ロ ウ イ ル ス に よ る 発 now ク ロ ー ニ ン グ method で そ の phenotype を レ ス キ ュ ー す る heritage 伝 son を 単 from す る と い う よ う な ア プ ロ ー チ も necessary か も し れ な い と exam え て い る. 2000 annual は when be 験 の purpose heritage 伝 son で あ る ホ モ ロ ガ ス リ コ ン ビ ナ ー ゼ は have ら れ な か っ た が, レ ト ロ ウ イ ル ス 発 now ク ロ ー ニ ン を グ method with い た for の research に よ り, blood cells の や raised colonization に masato and す る, マ ウ ス お よ び ヒ ト MgcRacGAP heritage 伝 son を 単 し, with son 伝 が cytoplasm points The important な service is to cut を Dan って る とを とを.

项目成果

Kawashima,T.et al.: "MgcRacGAP is involved in the control of growth and differentiation of hematopoietic cells"Blood. 96. 2116-2124 (2000)

Kawashima,T.et al.：“MgcRacGAP 参与造血细胞生长和分化的控制”血液。

Hirose,K., et al.: "MgcRacGAP is involved in cytokinesis through associating with mitotic spindle and midbody"J.Biol.Chem. (印刷中). (2001)

Hirose, K. 等人：“MgcRacGAP 通过与有丝分裂纺锤体和中体结合参与胞质分裂”J.Biol.Chem.（出版中）。