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マウスホモロガスリコンビナーゼの遺伝子クローニング

小鼠同源重组酶基因克隆

基本信息

批准号：
12877018
负责人：
野阪哲哉
金额：
--
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

当研究の目的はレトロウイルス発現クローニング法を用いて、マウスにおける遺伝子相同組換え(HR)に関与するホモロガスリコンビナーゼ遺伝子そのもの、またはその活性化遺伝子を単離することである。実験は、まず最初に、targeting vectorが導入されたときにHRを生ずるとNeomycin耐性遺伝子が発現するように細工したNIH3T3細胞由来のレポーター細胞株を樹立し、その細胞にHR活性の高い細胞であるES細胞およびニワトリDT40細胞由来のcDNAをレトロウイルスを用いて各々発現させた。次に、targeting vectorを導入し、しかるべきcDNA存在下で相同組替えを起こしたクローンをG418存在下で単離するという流れで行った。結果はNeo耐性クローンは全く得られず、NIH3T3細胞においては一つの遺伝子の補充だけではHRを生ぜしめることはできないことが判明した。現在、基底レベルのHR活性が比較的高いと思われるCHO細胞を用いて同様の実験を検討している。場合によっては予め、変異原処理によりランダムに遺伝子を破壊しておいてHRが起こらなくした細胞株を用いて、レトロウイルスによる発現クローニング法でその表現型をレスキューする遺伝子を単離するというようなアプローチも必要かもしれないと考えている。2000年度は当実験の目的遺伝子であるホモロガスリコンビナーゼは得られなかったが、レトロウイルス発現クローニング法を用いた一連の研究により、血球細胞の分化や増殖に関与する、マウスおよびヒトMgcRacGAP遺伝子を単離し、同遺伝子が細胞質分裂にも重要な役割を担っていることを見出した。

When the purpose of the study is to develop a new method for the identification and identification of the same component (HR), it is related to the identification and identification of the same component (HR). The initial targeting vector was introduced into the NIH 3T3 cell-derived cell line, and the high HR activity cell line was established. The targeting vector was introduced into the ES cell-derived cDNA of the DT40 cell-derived cell line. In the presence of the targeting vector, the same set of vectors was introduced and the same sequence was introduced in the presence of G418. The results showed that NIH 3T3 cells were resistant to Neo, and the complement of Neo and Neo genes was positive. Now, the HR activity of basal cells is higher than that of CHO cells. In this case, the phenotype of the cell line was detected in the presence of the gene, and the gene was detected in the presence of the gene. In 2000, the research on the application of the target gene method in the development of blood cell differentiation and proliferation was carried out continuously. The results showed that the important service of cytoplasmic division of the same gene was involved in the differentiation and proliferation of blood cells.