レトロウイルスcDNA発現ライブラリーによる未知のヒト白血病原因遺伝子の探索

使用逆转录病毒 cDNA 表达文库搜索未知的人类白血病致病基因

• 批准号: 09877205
• 负责人: 野阪 哲哉
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877205/
• 关键词: 白血病; cDNA発現ライブラリー; レトロウイルス; STAT5; 癌遺伝子

我々はヒト白血病に関る未知の癌遺伝子をfunctional assayにて単離することを目的に、研究を開始した。まず、急性骨髄性白血病患者由来で第7染色体が片方欠落した(Mono-somy7)核型をもつ新規細胞株(中畑龍俊研究室で樹立)よりmRNAを抽出、レトロウイルスcDNA発現ライブラリーを作製し、IL-3依存性細胞株Ba/F3に遺伝子導入し、癌化責任遺伝子の単離を試みたが、現在までのところIL-3非依存性に増殖するcloneは得られていない。一方、我々は、PCR directed random mutagenesisとレトロウイルス発現システムを組合せて、マウスにおける転写因子STAT5の恒常的活性型を3種類、Ba/F3細胞を用いて同定した。興味深いことに、上記3種の恒常的活性型STAT5は、IL-3非依存性にBa/F3細胞を増殖させる反面、IL-3存在下では逆に、分化またはアポトーシスを誘導することが判明した。これらの表現型は、STAT5の下流の種々の遺伝子のうち、どの遺伝子が活性化されるかによって規定されていた。これらの実験系は、野生型のSTAT5の生物学的役割を考える上でも有用である。最近、ある種のヒト白血病はTEL-JAK2キメラ遺伝子形成によるJAK2の活性化が原因であることが報告されたが、種々のヒト白血病患者細胞におけるSTAT3、5の恒常的活性化は周知の事実である。したがって、STAT5のリン酸化が亢進している患者サンプルを解析し、その原因がSTAT5そのものの構造異常によるものなのか、STAT5より上流のシグナルが持続的にonの状態になっているためなのかを明らかにする目的で、患者細胞由来STAT5遺伝子をレトロウイルスを用いてBa/F3細胞において発現させ、IL-3非依存性に増殖するcloneが得られるか否か、検討中である。これまでのところ患者細胞由来のSTAT5遺伝子に突然変異は見つかっていない。

I 々 は ヒ ト leukemia に masato る unknown の carcinoma heritage 伝 son を functional assay に て 単 from す る こ と に を purpose, research を began し た. ま ず, patients with acute leukaemia of sex of bone marrow origin で chromosome 7 が piece party owes fall し た (Mono - somy7) karyotype を も つ new rules cell line (Tian Long Jun laboratory で set) よ り mRNA を extraction, レ ト ロ ウ イ ル ス cDNA 発 now ラ イ ブ ラ リ ー を as し, IL - 3 dependency cell lines Ba/F3 に 伝 import し, cancer Try the responsibility but 伝 son の 単 from を み た が, now ま で の と こ ろ IL - 3 the dependency に raised colonization す る clone は must ら れ て い な い. A party, I 々 は, PCR directed random mutagenesis と レ ト ロ ウ イ ル ス 発 now シ ス テ ム を combination せ て, マ ウ ス に お け る planning write factor STAT5 の constant active を 3 kinds, Ba/F3 cells を い て with fixed し た. Interest as deep い こ と に, written three の constant activity type STAT5 は, IL - 3 the dependency に Ba/F3 cells を raised colonization さ せ る reverse side, the presence of IL - 3 で は inverse に, differentiation ま た は ア ポ ト ー シ ス を induced す る こ と が.at し た. こ れ ら の phenotype は, STAT5 の obscene の kind 々 の posthumous son 伝 の う ち, ど の posthumous son 伝 が activeness さ れ る か に よ っ て rules さ れ て い た. The を examination of the <s:1> experimental department of <s:1> and the wild-type <s:1> STAT5 of biology える is useful for で で である. Recently, あ る kind の ヒ ト leukemia は TEL - JAK2 キ メ ラ heritage 伝 child form に よ る JAK2 の activeness が reason で あ る こ と が report さ れ た が, kind of 々 の ヒ ト patients with leukemia cells に お け る STAT3, 5 の constant activeness は known の things be で あ る. し た が っ て, STAT5 の リ ン acidification が hyperthyroidism し て い る patients サ ン プ ル を analytical し, そ の reason が STAT5 そ の も の の tectonic anomaly に よ る も の な の か, STAT5 よ り upper の シ グ ナ ル が hold 続 に on の state に な っ て い る た め な の か を Ming ら か に す cell origin STAT5 る purpose で, patients survived 伝 son を レ ト ロ ウ イ ル ス を with い て Ba/F3 cells に お い て 発 now さ せ, IL - 3 the dependency に raised colonization す る clone が must ら れ る か no か, beg the 検 で あ る. Youdaoplaceholder3 れまで と と ろ ろ the origin of the patient 's cells 伝 STAT5 progeny に sudden change see な って って な な な.

项目成果

Onishi,M.,et al.: "Cytokine receptors:Structure and signal transduction" Int.Rev.Immunol.16. 617-634 (1998)

Onishi,M.,et al.：“细胞因子受体：结构和信号转导”Int.Rev.Immunol.16。

Morikawa,Y.,et al.: "Induction of synaptosomal-associated protein-23 Kd(SNAP.23)by various cytokines" Blood. 92. 129-135 (1998)

Morikawa,Y.,et al.：“各种细胞因子诱导突触体相关蛋白 23 Kd(SNAP.23)”血液。

Sohn,S.J.,et al.: "Requirement for Jak3 in mature T-cells:Its role in regulation of T cell homecstasis" J.Immunol.160. 2130-2138 (1998)

Sohn,S.J.,et al.：“成熟 T 细胞中 Jak3 的需求：其在 T 细胞稳态调节中的作用”J.Immunol.160。

Onishi M et al.: "Cytokine receptors : Structure and signal transduction" Int.Rev.Immunol.(in press). (1998)

Onishi M 等人：“细胞因子受体：结构和信号转导”Int.Rev.Immunol.（印刷中）。

Ohishi,M.,et al.: "Identification and characterization of a constitutively active STAT5A mutant that promotes cell proliferation" Mol.Cell.Biol.18. 3871-3879 (1998)

Ohishi,M.,et al.：“促进细胞增殖的组成型活性 STAT5A 突变体的鉴定和表征”Mol.Cell.Biol.18。