レトロウイルスcDNA発現ライブラリーによる未知のヒト白血病原因遺伝子の探索

使用逆转录病毒 cDNA 表达文库搜索未知的人类白血病致病基因

• 批准号: 09877205
• 负责人: 野阪 哲哉
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877205/
• 关键词: 白血病; cDNA発現ライブラリー; レトロウイルス; STAT5; 癌遺伝子

我々はヒト白血病に関る未知の癌遺伝子をfunctional assayにて単離することを目的に、研究を開始した。まず、急性骨髄性白血病患者由来で第7染色体が片方欠落した(Mono-somy7)核型をもつ新規細胞株(中畑龍俊研究室で樹立)よりmRNAを抽出、レトロウイルスcDNA発現ライブラリーを作製し、IL-3依存性細胞株Ba/F3に遺伝子導入し、癌化責任遺伝子の単離を試みたが、現在までのところIL-3非依存性に増殖するcloneは得られていない。一方、我々は、PCR directed random mutagenesisとレトロウイルス発現システムを組合せて、マウスにおける転写因子STAT5の恒常的活性型を3種類、Ba/F3細胞を用いて同定した。興味深いことに、上記3種の恒常的活性型STAT5は、IL-3非依存性にBa/F3細胞を増殖させる反面、IL-3存在下では逆に、分化またはアポトーシスを誘導することが判明した。これらの表現型は、STAT5の下流の種々の遺伝子のうち、どの遺伝子が活性化されるかによって規定されていた。これらの実験系は、野生型のSTAT5の生物学的役割を考える上でも有用である。最近、ある種のヒト白血病はTEL-JAK2キメラ遺伝子形成によるJAK2の活性化が原因であることが報告されたが、種々のヒト白血病患者細胞におけるSTAT3、5の恒常的活性化は周知の事実である。したがって、STAT5のリン酸化が亢進している患者サンプルを解析し、その原因がSTAT5そのものの構造異常によるものなのか、STAT5より上流のシグナルが持続的にonの状態になっているためなのかを明らかにする目的で、患者細胞由来STAT5遺伝子をレトロウイルスを用いてBa/F3細胞において発現させ、IL-3非依存性に増殖するcloneが得られるか否か、検討中である。これまでのところ患者細胞由来のSTAT5遺伝子に突然変異は見つかっていない。

We would like to tell you that the functional assay of the unknown cancer cell of leukemia will be separated from the purpose of the study and the beginning of the study. The origin of patients with acute osteoblastic leukemia is chromosome 7 chromosome deficiency (Mono-somy7), karyotype, new regulation cell line, mRNA cell line, cDNA cell line, IL-3 dependent cell line, Ba/F3 cell line, cancer cell line, cancer cell line, tumor cell line, tumor cell line, cancer cell line, It is now possible to obtain IL-3-independent colonization and clone colonization. One party, our company, PCR directed random mutagenesis system, we can see that the information system is the same as that of STAT5, the constant active type 3, and the cell of Ba/F3. There are three kinds of constant active STAT5, the reverse side of IL-3 independent Ba/F3 cell culture, the reverse side of cell culture in the presence of IL-3, and the differentiation of phenotype. For example, the table type, the STAT5 system, and the activation of the system, it is stipulated that the system is in operation. The biology of the wild type "STAT5" and the department of the wild type are useful in the study. Recently, the reason for the formation of viral JAK2 activation in patients with leukemia, TEL-JAK2, leukemia, cell cycle, STAT3 and 5-year-old constant activation is well known. The causes of hyperacidification, hyperacidizing, hyperacidizing and abnormal symptoms of the patient, the causes of the STAT5, the causes of the on, the on status of the STAT5, the upstream, the on, the purpose, the origin of the patient, the cell of the patient, and the cell of the patient. IL-3 is not dependent on colonization and clone, but not in the middle of the disease. The origin of the patient's cell is STAT5. All of a sudden, the patient is suffering from the disease.

项目成果

Onishi,M.,et al.: "Cytokine receptors:Structure and signal transduction" Int.Rev.Immunol.16. 617-634 (1998)

Onishi,M.,et al.：“细胞因子受体：结构和信号转导”Int.Rev.Immunol.16。

Morikawa,Y.,et al.: "Induction of synaptosomal-associated protein-23 Kd(SNAP.23)by various cytokines" Blood. 92. 129-135 (1998)

Morikawa,Y.,et al.：“各种细胞因子诱导突触体相关蛋白 23 Kd(SNAP.23)”血液。

Sohn,S.J.,et al.: "Requirement for Jak3 in mature T-cells:Its role in regulation of T cell homecstasis" J.Immunol.160. 2130-2138 (1998)

Sohn,S.J.,et al.：“成熟 T 细胞中 Jak3 的需求：其在 T 细胞稳态调节中的作用”J.Immunol.160。

Onishi M et al.: "Cytokine receptors : Structure and signal transduction" Int.Rev.Immunol.(in press). (1998)

Onishi M 等人：“细胞因子受体：结构和信号转导”Int.Rev.Immunol.（印刷中）。

Ohishi,M.,et al.: "Identification and characterization of a constitutively active STAT5A mutant that promotes cell proliferation" Mol.Cell.Biol.18. 3871-3879 (1998)

Ohishi,M.,et al.：“促进细胞增殖的组成型活性 STAT5A 突变体的鉴定和表征”Mol.Cell.Biol.18。