レトロウイルス発現系を用いた発癌関連miRNAの探索

利用逆转录病毒表达系统寻找致癌相关的miRNA

• 批准号: 20659151
• 负责人: 野阪 哲哉
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659151/
• 关键词: miRNA; microRNA; レトロウイルスベクター; 発癌; 造血細胞腫瘍

当研究の目的は、遺伝子発現効率の良いレトロウイルス発現系を用いて、主に造血器腫瘍に関与するマウスmicroRNA(miRNA)を同定し、新規の発癌分子機構を明らかにするとともに、新たな治療法の開発に応用することである。我々はまず、MLL(Mixed Lineage Leukemia)関連白血病の癌化に関連するようなmiRNAの探索から開始した。最初に、4-hydroxytamoxifen(4-HT)の除去によりMLL-ENL(-Estrogen Receptor(ER))の作用を消失させた時に、造血細胞において発現レベルが変化するmiRNAをmicroarrayにて探索した。その結果、miR-XXX(未発表データ)の発現上昇が観察され、real time PCR法にて、確認した。miR-XXX自体は癌抑制遺伝子的に働いている可能性が考えられる。即ち、癌遺伝子的に働く遺伝子の発現を抑える遺伝子である可能性が高い。次に、MLL-ENLでtransformした細胞におけるmiR-XXXの強発現や、造血細胞におけるmiR-XXXのノックダウンの表現型を解析し、その標的遺伝子を明らかにする目的で、U6プロモーターを用いた、shRNA発現用のレトロウイルスself-inactivationベクターを構築した。現在、miR-XXXの機能解析を行い、引き続き、他のmiRNAの探索・機能解析も行っている。上記shRNA発現用レトロウイルスベクターは初代培養細胞などで特定の遺伝子を手軽に恒常的にノックダウンさせ、当該遺伝子機能を解析する際にも役立つ。実際、純化した造血幹細胞を用いて、それらの細胞において特異的に発現している遺伝子を複数同定したが(未発表データ)、それらをノックダウンすることにより、造血幹細胞における癌遺伝子発現による癌化が部分的に抑制されることが判明した。miRNAを含めた統合的遺伝子機能解析が造血器腫瘍発生機構の解明にとって重要である。

When the purpose of the study is to determine the efficiency of the research and the effectiveness of the microR NA (miRNA) is the same as the established one, the new cancer molecular structure is clear and the cancer molecular mechanism is clear, and the new treatment method is the same as the new treatment method. I started to explore the relationship between MLL (Mixed Lineage Leukemia) and the cancerization of leukemia. Initial removal of 4-hydroxytamoxifen(4-HT) MLL-ENL(-Estrogen The function of Receptor (ER) disappears when the time comes, and the hematopoietic cells appear and change, and the microarray of microarray is explored.そのResults, miR-XXX(无発 tableデータ) の発appears to increase, Observation of され, real time PCR method, した. The possibility of miR-XXX autologous cancer suppression has been investigated. That is, the probability of cancer leaving the child is high. Time, MLL-ENL transform cells, miR-XXX, hematopoietic cells, miR-XXX, phenotype analysis, analysis The target's remaining target is the target, U6プロモーターを用いた, shRNA発Currently using the self-inactivation self-inactivation system. Now, the functional analysis of miR-XXX is done, the introduction is done, and the exploration and functional analysis of other miRNAs are done. The above-mentioned shRNA is currently used in the primary cultured cells of レトロウイルスベクターは and is a specific method. The constant にノックダウンさせ of the child's hands, the function of the child's hand should be analyzed and the するinterior にもServant established つ. Really, purified hematopoietic stem cells are used, and the specific cells are specific. , Hematopoietic stem cell stem cells It is clear that it is possible to suppress the occurrence of cancer syndrome and to partially suppress the canceration. It is important to understand the mechanism of hematopoietic tumor and neoplasia development by integrating the functions of miRNA.

项目成果

ヒトパラインフルエンザ2型ウイルス (hPIV2) P蛋白上の核移行シグナル (NLS) と核外移行シグナル (NES) の同定

人副流感病毒2型病毒（hPIV2）P蛋白的核定位信号（NLS）和核输出信号（NES）的鉴定

• 发表时间: 2009
• 作者: 西尾真智子;大塚順平;鶴留雅人;野阪哲哉
• 通讯作者: 野阪哲哉

FLT3-ITD induces ara-C resistance in myeloid leukemic cells through the repression of the ENT1 expression

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2009.10.094
• 发表时间: 2009-12-18
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Jin, Guilan;Matsushita, Hiromichi;Miyachi, Hayato
• 通讯作者: Miyachi, Hayato

Cv2, functioning as a pro-BMP factor via twisted gastrulation, is required for early development of nephron precursors

• DOI: 10.1016/j.ydbio.2009.11.013
• 发表时间: 2010-01-15
• 期刊: DEVELOPMENTAL BIOLOGY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Ikeya, Makoto;Fukushima, Kumi;Sasai, Yoshiki
• 通讯作者: Sasai, Yoshiki

Possible involvement of RasGRP4 in leukemogenesis

RasGRP4 可能参与白血病发生

• DOI: 10.1007/s12185-009-0299-0
• 发表时间: 2009
• 期刊: Int J Hematol
• 影响因子: 2.1
• 作者: Watanabe-Okochi N;Oki T;Komeno Y;Kato N;Yuji K;Ono R;Harada Y;Harada H;Hayashi Y;Nakajima H;Nosaka T;Kitaura J;Kitamura T.
• 通讯作者: Kitamura T.

Analysis of novel molecular mechanism in transformation by MLL-ENL targeting long-term hematopoietic stem cells.

MLL-ENL 靶向长期造血干细胞转化的新分子机制分析。

• 发表时间: 2010
• 作者: Ono R;Masuya M;Nakajima H;Enomoto Y;Miyata E;Kamisako T;Ito M;Suzuki K;Katayama N;Kitamura T;Nosaka T.
• 通讯作者: Nosaka T.