癌細胞に由来する免疫抑制因子のクローニングとその機能解析

癌细胞来源的免疫抑制因子的克隆及其功能分析

• 批准号: 12877333
• 负责人: 田中 瑞穂
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Matsumoto Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877333/
• 关键词: 免疫抑制; クローニング; 抗原提示細胞; 免疫抑制因子

癌細胞から抽出したtotal RNAからmRNAを抽出しcDNAライブラリーを作成した。UNIZAP II cDNAライブラリーから蛋白発現ベクターにサブクローニングし、約90kDa蛋白が得られた。この蛋白はポリアクリルアミド電気泳動法によりダイマーを形成していることが推測された。今回得られた蛋白をコードするcDNAをシャトルベクターのマルチクローニングサイトに挿入し、哺乳動物細胞である3T3マウス線維芽細胞(3T3細胞)に遺伝子導入した。形質転換した培養細胞を位相差顕微鏡で観察したところ、野生型3T3細胞ではコンタクトインヒビションによる増殖抑制がみられたが、形質転換した3T3細胞では、野生型3T3細胞と同様にコンタクトインヒビションが観察されたが、細胞間においてパイルアップ現象がみられた。また、形質転換した3T3細胞の倍加時間は、野生型に比べ短縮された。単核球細胞を用いた活性酸素産生能を検討するbioassayでは、野生型3T3細胞との共存培養に比べ、形質転換した3T3細胞との共存培養により単核球の活性酸素産生量が低下することが明らかとなった。以上の結果より、癌細胞に由来する本蛋白は、細胞増殖を促進するとともに共存培養した抗原提示細胞の活性化に影響を与えているものと考えられた。

Cancer cells ら ら extract <s:1> たtotal RNA ら らmRNAを extract cDNAラ ブラリ ブラリ ブラリ を を to make た た. UNIZAP II cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら protein 発 now ベ ク タ ー に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し, about 90 kda protein が ら れ た. こ の protein は ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド 気 swimming method に よ り ダ イ マ ー を form し て い る こ と が speculation さ れ た. Today back to ら れ た protein を コ ー ド す る cDNA を シ ャ ト ル ベ ク タ ー の マ ル チ ク ロ ー ニ ン グ サ イ ト に scions into し, mammalian cells で あ る 3 t3 マ ウ ス line d bud cells (3 t3 cell) に heritage 伝 son import し た. Form quality planning in し た culture cell を bit differ 顕 micromirror で 観 examine し た と こ ろ, wild type 3 t3 cell で は コ ン タ ク ト イ ン ヒ ビ シ ョ ン に よ る raised colonization inhibit が み ら れ た が, form quality planning in し た 3 t3 cell で は と, wild type 3 t3 cells with others に コ ン タ ク ト イ ン ヒ ビ シ ョ ン が 観 examine さ れ た が, intercellular に お い て パ イ ル ア ッ Youdaoplaceholder0 phenomenon がみられた. Youdaoplaceholder0, shape and cytoplasm 転 are exchanged for <s:1> た3T3 cells with <s:1> doubling time, and wild-type に is shorter than べ された された. 単 bulge cells を using い た acid active element can produce を beg す 検 る bioassay で は, wild type 3 t3 cell と の coexistence cultivation に than べ, quality, and the planning for し た 3 t3 cell と の coexistence cultivation に よ り 単 nuclear ball low discharge の acid active element が す る こ と が Ming ら か と な っ た. の above results よ り, cancer cells に origin す る は this protein, cell rights colonization を promote す る と と も に coexistence cultivation し た antigen の tip cells activeness に influence を and え て い る も の と exam え ら れ た.