NO情報伝達系による卵胞発育・閉鎖の調節機構及びNO合成酵素の活性調節機構の分子生物的解明

从分子生物学角度阐明NO信号转导系统对卵泡发育和闭锁的调控机制以及NO合酶活性的调控机制

基本信息

  • 批准号:
    01J04652
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.3万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2001
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2001 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

卵巣顆粒膜細胞に対するGnRH antagonist (GnRHant)の直接作用【目的】我々は,下垂体摘除した未熟ラットにおいてGnRHantの投与により卵胞発育がFSH投与と同程度に促進されることを報告してきた.今回,成熟顆粒膜細胞の増殖に対するGnRHantの直接効果を未熟顆粒膜細胞との対比で検討した.【方法】(1)未熟顆粒膜細胞は,24日齢Wistar系幼若雌ラットの卵胞より採取した.成熟顆粒膜細胞は,幼若ラットにpregnant mare serum gonadotropin 10IUを皮下注射し48時間後に採取した.培養細胞にGnRHantとしてCetrorelix 10μMを添加し,24時間後,BrdU取り込み法によりDNA合成能を測定した.(2)Flow cytometryにより細胞周期分布を解析した.(3)癌抑制蛋白および細胞周期制御因子の蛋白発現量をWestern blot法により検討した.【成績】(1)Cetrorelix添加により,未熟顆粒膜細胞のDNA合成能に変化はなかったが,成熟顆粒膜細胞では17%抑制された.以下,成熟顆粒膜細胞において,(2)G2/M期は8.3%増加した.(3)cyclin Bの蛋白発現量は46.3%減少したが,p53,p21,phospho-cdc2(Tyr15のリン酸化による不活型cdc2)の蛋白発現量は各々28.3%,43.8%,44.6%増加し,cdc2の蛋白発現量に変化はなかった.【結論】GnRHantによる直接的な未熟顆粒膜細胞の増殖促進効果ならびに成熟顆粒膜細胞の増殖抑制効果が認められた.後者のメカニズムのひとつとして,p53の活性を増強しcdc2を不活化することより細胞周期のG2/M期停止をもたらすことが示唆された.
Egg 巣 granular cell membrane に す seaborne る GnRH antagonist (GnRHant) の direct effect 【 objective 】 I 々 は, pituitary gland excision under し た unripe ラ ッ ト に お い て GnRHant の cast with に よ り follicle 発 yukon が cast with と FSH level に promote さ れ る こ と を report し て き た. Today back, mature granular cell membrane の raised colonization に す seaborne る GnRHant の directly working fruit を unripe granular cell membrane と の than で seaborne beg し 検 た. [method] (1) unripe は particles membrane cells, 24 齢 if young female Wistar department ラ ッ ト の follicle よ り take し た. Mature granular membrane cells, young ラットにpregnant mare serum gonadotropin 10IUを subcutaneously injected for 48 hours に taken た. Cultured cells にGnRHantと <s:1> て てCetrorelix 10μMを add <s:1>,24 hours later,BrdU takes 込み, 込み, によ DNA synthesis energy を to determine た.(2)Flow cytometryによ cell cycle distribution を analysis of <s:1> た.(3) cancer suppressor protein および cell cycle control factor protein occurrence amount をWestern Beg し blot method に よ り 検 た. 【 results 】 (1) add に Cetrorelix よ り, unripe particles membrane cells の DNA synthesis に variations change は な か っ た が, mature granular cell membrane で は 17% inhibition さ れ た. Below, mature granular membrane cells にお にお て,(2) in the G2/M phase, <s:1> 8.3% increase of <s:1> た.(3)cyclin B の protein 発 now は 46.3% reduce し た が, p53, p21 and phospho - cdc2 (Tyr15 の リ ン acidification に よ る not live cdc2) の protein 発 は 々 each 28.3%, 43.8%, 44.6% raised し, cdc2 protein の 発 quantity に now - the は な か っ た. 【 conclusion 】 GnRHan The direct な effect of promoting the <s:1> proliferation of unripe granular membrane cells by tによる and the inhibitory effect of inhibiting the <s:1> proliferation of mature granular membrane cells by t が recognize められた. The latter の メ カ ニ ズ ム の ひ と つ と し て, p53 の active を raised strong し cdc2 を inactive す る こ と よ り の G2 / M phase cells cycle stop を も た ら す こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

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