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タンパク質を特異的に認識する強相関ペプチドポリマーマテリアルの創成

创建特异性识别蛋白质的强相关肽聚合物材料

基本信息

批准号：
13031034
负责人：
横山憲二
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Japan Advanced Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに我々は、ファージ提示系ランダムペプチドライブラリーを用いることにより、グルコースオキシダーゼ(GOx)の52-58番目および197-203番目のアミノ酸配列に対し親和性を示す12merペプチドを取得している。本研究では、さらに強い非共有結合によりタンパク質を認識するペプチドポリマーの創成を試みた。1.ペプチドモノマーの固相合成GOxを認識するペプチド配列を持つアミノ酸側鎖保護基付ビニルモノマーPM1(GOxの52-58番目を認識)、PM2(同197-203番目)をFmoc固相法により合成した。N末端αアミノ基にはリンカー6-aminohexanoic acidを介してアクリロイルを固相上で導入し、側鎖保護基を残したままクリベージした。次に、逆相HPLCにて分取し、MALDI-TOF質量分析にて生成物を確認した。2.プチドポリマーの合成と親和性の評価PM1またはPM2と両親媒性のN, N-ジエチルアクリルアミドをコモノマーとし、ラジカル共重合反応を行った。次にトリフルオロ酢酸を主成分とするクリベージカクテルでペプチド側鎖を脱保護した後、分画分子量1万の限外ろ過膜で低分子量成分を分離し、目的のペプチドポリマーを得た。合成したペプチドポリマーとGOxとの親和性は、表面プラズモン共鳴測定装置により評価した。その結果、いずれのペプチドポリマーの場合も基板上に固定化したGOxに対し高い親和性を示したのに対し、ヘモグロビンや牛血清アルブミンに対してはほとんど結合しなかった。また、単独のペプチドとペプチドポリマーのGOxに対する親和性を比較した。その結果、いずれも単独のペプチドにくらべ、同等あるいはそれ以上の親和性を示した。以上から、ペプチドを高分子化することにより、ペプチドが持つ親和性をさらに上昇させることに成功した。

This indicates that the 12-mer affinity for acid alignment in the 52-58 and 197-203 segments of GOx is available in the 12-mer affinity for acid alignment. This study is aimed at exploring the possibility of creating a new type of hybrid. 1. Solid phase synthesis of GOx by selecting and matching acid side-lock protection groups PM1 (GOx 52-58) and PM2(same as 197-203). N-terminal α-amino acid residues are introduced into the solid phase, and side-locked protective groups are introduced into the solid phase. Next, reverse phase HPLC analysis, MALDI-TOF mass analysis and product identification 2. Evaluation of the synthetic affinity of PM1 and PM2 and the affinity of N, N-type molecules. The main component of the secondary acetic acid is separated from the low molecular weight component by the outer membrane with a molecular weight of 10,000 after deprotection. The affinity of the synthetic In the case of immobilization on the substrate, the high affinity is shown in the table below. Comparison of affinity between two groups The results of the study show that there is no difference between the two groups. The above is a success story.