Nkx2.5を軸とした心臓の発生機構の系統的解析

以Nkx2.5为中心系统分析心脏发育机制

• 批准号: 13045019
• 负责人: 田中 誠
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13045019/
• 关键词: 発生・分化; 循環器・高血圧; 遺伝子; 再生医学; 先天性心疾患

本研究は胎生初期から心臓で特異的に発現するホメオボックス遺伝子であるNkx2.5を軸に心臓の発生を制御する分子カスケードを系統的に解析することを目的としている。本研究の第一の目的は、Nkx2.5の発現を制御する上流遺伝子を同定することにより、マウスにおける心筋系列(cardiac lineage)の決定機構を明らかにすることである。Nkx2.5周辺のゲノムDNAを含むBACクローンを複数クローニングし、上流40kbまでカバーする5種類のレポーターコンストラクトを作製した。現在、ES由来心筋細胞を用いてのレポーターアッセイが進行中であり、さらにエンハンサーを絞り込んでいく予定である。本研究の第二の目的は、Nkx2.5の下流遺伝子群を同定することにより、心臓の初期形成やルーピングに重要な遺伝子群をクローニングすることである。8.5日胚の心臓より採取したRNAをT7またはPCRを用いて増幅し、それぞれDNAチップ、サブトラクションに用いた。得られた遺伝子については、野生型とホモの心臓での発現の差をin situ hybridizationにて確認した。今までに、ホモの心臓で発現がない遺伝子、ホモの心臓で発現が異常に増加している遺伝子を数種ずつ単離しており、現在発現パターンや機能について解析中である。Nkx2.5は、胎生中期以降の心房中隔の形成や心房内・房室間での刺激の伝導にも重要な役割を果たすが、心房のみでNkx2.5をノックアウトしたマウスを作製し、それらのメカニズムを調べることが本研究の第三の目的である。ミオシン軽鎖2Vの遺伝子座にNkx2.5をノックインするためのコンストラクトを作製し、ES細胞にトランスフェクションした。相同組みかえ体を単離し、さらにCre発現ベクターにより、Neoカセットを取り除いた相同組みかえクローンを得た。胚盤胞への注入が終了し、現在キメラマウスの誕生を待っているところである。

The purpose of this study is to analyze the molecular structure of the early stage of fetal development. The first objective of this study is to clarify the mechanism for controlling the development of Nkx2.5 by determining the identity of upstream genes and cardiac lineages. Nkx2.5 peripheral DNA contains 5 types of DNA including BAC and upstream 40kb. Now, ES is derived from the heart muscle cells. It is in progress. It is in progress. The second objective of this study is to determine the identity of downstream genetic subgroups of Nkx2.5, and to determine the identity of downstream genetic subgroups of Nkx2.5. 8.5 The DNA sequence was amplified by PCR using T7, and the DNA sequence was amplified by PCR using T7. The difference in the occurrence of the virus in situ hybridization was confirmed. Now, the heart of the machine is found in the middle of the message, the heart of the machine is found in the abnormal, the message is increased in the middle of the message, several kinds of messages are separated, and now the function is found in the analysis. Nkx2.5 is the third objective of this study. The Nkx2.5 is the first time that a cell has been tested. The same group of The injection of blastoderm cells has ended, and now it has been born.

项目成果

Makoto Tanaka: "Nkx2.5 and Nkx2.6, murine homologs of Drosophila tinman, are required for development of the pharynx"Molecular and Cellular Biology. 21. 4391-4398 (2001)

Makoto Tanaka：“Nkx2.5 和 Nkx2.6 是果蝇tinman 的小鼠同源物，是咽部发育所必需的”分子和细胞生物学。