cDNAアレイ法を用いた急性腎不全における腎機能回復の可能性の予測

cDNA芯片法预测急性肾功能衰竭肾功能恢复的可能性

• 批准号: 13204017
• 负责人: 野入 英世
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204017/
• 关键词: 虚血再灌流障害; 急性腎不全; ヒト近位尿細管細胞; 低酸素ストレス; マクロアレイ法; non-RI

はじめに本研究では、客観的な評価基準としてアレイ法を導入し、遺伝子発現のパターンにより急性腎不全が可逆的か不可逆的かをin vitro・in vivoにおいて検討した。本年度の成果 虚血再灌流障害は、近位尿細管細胞障害が病態の首座であることより、ヒト近位尿細管細胞HKC-8を用いた。HKC-8の機能的解析及び低酸素ストレスの最適条件は昨年度決定した。37℃にて嫌気バックを用いて可逆的障害モデルは低酸素化時間時間、再酸素化時間が、非可逆的障害モデルでは低酸素化時間時間、再酸素化時間が最適である結果を用いた。昨年度HKC8にて確立した低サイクルPCR法を組合せたnon-RIターゲット増幅法によりClonTech社製nylon membrane cDNAアレイを行った。HKC-8について検討した遺伝子総数は3528、低酸素ストレスに対して可逆的な実験方法(低酸素時間+再酸素時間)では対照群に対してセリン・プロテアーゼ、Raf反応性蛋白の遺伝子群が発現増強を認めた。一方、非可逆的な実験群(低酸素15時間+再酸素時間)は対照群に対してG1/S cyclin、IL-1受容体の遺伝子群が発現増強を認めた。ここで発現の増減は1.8倍以上の差を有するもののみに絞り、2〜3回の実験で再現性のある結果を採用した。次にin vivoの実験としてマウスの虚血再灌流モデルでの実験を行った。マウスは遺伝子操作動物が多く有用性が高いと考えられた。しかし、マウスではまず虚血再灌流モデル自体が十分確立しておらず、再現性のあるデータを得るための実験手技の調整に時間要した。特に温度管理は重要であった。マウスでは可逆性のモデルとして15分間の虚血時間と24時間の再灌流時間、非可逆性モデルとして虚血時間45分間、再灌流時間24時間をとった。当初C57/BL、BDF1などの系統で行ったが、再現性がやや悪く近交系ICRを用いて良好な再現性を得ることができた。虚血再灌流腎障害の首座である腎皮髄境界部組織により遺伝子総数2370をClonTech社製nylon membrane cDNAアレイで解析した。可逆群でFK506結合蛋白の遺伝子群が発現増強を認め、また非可逆群ではMEKや5'nuclease、IL-18の遺伝子群が発現増強を認めた。発現低下を生じた遺伝子群としては、ラミニン、CSF及びその受容体が認められたが、これらは可逆性・非可逆性の両群において認められた。現在ラットにおける検討を開始しており、年度内に終了の見込みである。

は じ め に this study で は, guest 観 な evaluation benchmark 価 と し て ア レ イ method を import し, but 伝 発 is の パ タ ー ン に よ り acute renal insufficiency が reversible か irreversible か を in vitro, in vivo に お い て beg し 検 た. This year's achievements include the impairment of reperfusion of deficient blood が and the impairment of proximal urinary tubule cells が pathological <s:1> first である た とよ とよ and ヒト proximal urinary tubule cells HKC-8を and た た. The analysis of the function of HKC-8 and the optimal conditions for び low acid content ストレス <s:1> were determined last year by た. 37 ℃ に て too 気 バ ッ ク を with い て reversible handicap of モ デ ル は low acid element time time, acid element again が, non reversible handicap of モ デ ル で は low acid element during the time, then the optimal で acid element time が あ る results を い た. Low yesterday annual HKC8 に て establish し た サ イ ク ル を PCR method combined せ た non - RI タ ー ゲ ッ ト raised amplitude method に よ り ClonTech club made nylon be cDNA ア レ イ を line っ た. Beg し HKC - 8 に つ い て 検 た heritage 伝 総 number 3528, low acid element ス は ト レ ス に し seaborne て reversible な be 験 method (low acid + acid element again time) で は according to group of seaborne に し seaborne て セ リ ン · プ ロ テ ア ー ゼ, Raf anti 応 protein の heritage 伝 subgroup が 発 now raised strong を recognize め た. One side, the irreversible な experimental group (low acid time + re-acid time) <s:1> contrast group に shows an increase in を recognition めた against the てG1/S cyclin and IL-1 receptor 伝 subgroup が. こ こ で 発 is の raised は reduction above 1.8 times of poor の を す る も の の み stranded に り, 2 ~ 3 back の be 験 で reproducibility の あ る results を し た. Youdaoplaceholder0 in vivo vivo vivo experience と て て ウス ウス <s:1> reperfusion of deficient blood モデ で で を experience を った. Youdaoplaceholder0 ウス 伝 the 伝 offspring can manipulate animals が many く useful が high と examination えられた. し か し, マ ウ ス で は ま ず empty blood perfusion モ デ ル autologous が very established し て お ら ず, reproducibility の あ る デ ー タ を have る た め の be 験 manipulation の adjust に time to し た. Temperature management is particularly important であった. マ ウ ス で は reversible の モ デ ル と し て の virtual blood と 24 time between 15 points の perfusion time and again not reversible モ デ ル と し て virtual time between 45 points, blood perfusion time 24 time again を と っ た. When C57 / BL, BDF1 な ど の system line で っ た が, reproducibility が や や 悪 く inbred line ICR を with い て な good reproducibility を must る こ と が で き た. Empty blood perfusion of renal handicap of の first で あ る renal skin marrow state department organization に よ り heritage 伝 総 number 2370 を nylon ClonTech club system be cDNA ア レ イ で parsing し た. Traces of reversible group で FK506 binding protein の 伝 subgroup が 発 now raised strong を confess め, ま た non reversible group で は MEK や 5 'nuclease, IL - 18 の heritage 伝 subgroup が 発 now raised strong を recognize め た. Low 発 now を raw じ た heritage 伝 subgroup と し て は, ラ ミ ニ ン, CSF and び そ の が recognition by let body め ら れ た が, こ れ ら は reversibility, irreversibility の struck group に お い て recognize め ら れ た. Now ラットにおける検 to discuss を to start に てお ラットにおける検 and に to end 込みである see 込みである.

项目成果

Goligorsky MS, Brodsky SV, Noiri E: "Nitric oxide in acute renal failure : NOS versus NOS"Kidney Int. (in press). (2002)

Goligorsky MS、Brodsky SV、Noiri E：“急性肾衰竭中的一氧化氮：NOS 与 NOS”Kidney Int。

Noiri E, Ozawa H, Fujita T, Nakao A: "Pharmacokinetics of cetirizine in chronic hemodialysis patients"Nephron. 89. 101-104 (2001)

Noiri E、Ozawa H、Fujita T、Nakao A：“西替利嗪在慢性血液透析患者中​​的药代动力学”肾单位。

Suzuki T, Takemura H, Noiri E, Nosaka K, Toda A, Taniguchi S, Uchida K, Fujita T, Kumura S, Nakao A: "Puromycin aminonucleoside induces apoptosis and increases HNE in cultured glomerular epithelial cells"Free Radic Biol Med. 31. 615-623 (2001)

Suzuki T、Takemura H、Noiri E、Nosaka K、Toda A、Taniguchi S、Uchida K、Fujita T、Kumura S、Nakao A：“嘌呤霉素氨基核苷在培养的肾小球上皮细胞中诱导细胞凋亡并增加 HNE”Free Radic Biol Med。

Yamamoto T, Tada T, Brodsky Sv, Tanaka H, Noiri E, Kajiya F, Goligorsky MS: "Intravital videomicroscopy of peritubular capillaries in renal ischemia"Am J Physiol. (in press). (2002)

Yamamoto T、Tada T、Brodsky Sv、Tanaka H、Noiri E、Kajiya F、Goligorsky MS：“肾缺血中管周毛细血管的活体视频显微镜”Am J Physiol。

Usui T, Hara M, Satoh H, Moriyama N, Kagaya H, Amano S, Oshika T, lshii Y, Ibaraki N, Hara C, Kunimi M, Noiri E, Tsukamoto K, Inatomi J, Kawakami H, Endou H, Igarashi T, Goto A, Fujita T, Araie M, Seki G: "Molecular basis of ocular abnormalities associate

臼井 T、原 M、佐藤 H、森山 N、加贺屋 H、天野 S、大石 T、lshii Y、茨木 N、原 C、国见 M、野里 E、冢本 K、稻美 J、川上 H、远藤 H、五十岚 T