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モデルB細胞を用いた細胞増殖・細胞死制御におけるPI3K活性化の分子機構

使用模型 B 细胞研究 PI3K 激活控制细胞增殖和细胞死亡的分子机制

基本信息

批准号：
13214105
负责人：
石合正道
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Kawasaki Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214105/
关键词：
PI3K p85サブユニット BCAP アダプター分子シグナル伝達 Akt活性化 JNK活性化 DT40細胞

项目摘要

イノシトールリン脂質3キナーゼ(PI3K)は、調節サブユニット(p85)と触媒サブユニット(P110)のヘテロ二量体から構成され、細胞の活性化・生存に重要であるが、その活性化機構はよくわかっていない。我々は既にPI3K p85のSH2ドメインに結合する新規分子BCAPを同定し、BCAPがレセプターとPI3Kをカップリングさせる重要なアダプター分子であることを示唆する結果を得ていたため、DT40細胞より作製したBCAP欠損細胞の詳細な解析を計画した。BCAP欠損細胞ではレセプター刺激によるAkt活性化の減少、JNK活性化の減少、アポトーシスの亢進が見られた。AktおよびJNKの活性化はPI3K活性化の下流に存在するため、BCAP欠損細胞ではPI3Kの活性化が十分おこっていないことが予想された。直接細胞内でPI3Kの酵素反応産物であるPIP-3の産生を測定すると、BCAP欠損細胞ではPIP-3産生の減少が見られ、先の予想が確かめられた。さらに、解析を推し進め、少なくともDT40細胞ではPI3Kp 85がレセプター刺激に伴い、細胞膜上に存在するGEM画分へ移行するが、BCAP欠損細胞ではその移行が著しく減少することを見いだした。つまり、PI3K活性化にはBCAPが必要であり、その活性化メカニズムはBCAPによるPI3Kの局在(GEM画分へ移行)の制御であることを示唆している。また、細胞増殖・細胞死制御におけるPI3K p85の役割を直接検討するためDT40細胞でp85ノックアウト細胞を構築することを目的に、ニワトリPI3K p85α、P85βさらに関連するP55γ遺伝子をクローニングした。

The lipid 3 (PI3K) is important for cell activation and survival. The results of the analysis of BCAP, a new molecule for PI 3K p85 and SH2, were obtained and detailed analysis of BCAP deficient cells was planned. BCAP deficient cells are stimulated by the presence of Akt, JNK, and other factors. Akt and JNK activation exist downstream of PI3K activation, and BCAP deficient cells are expected to activate PI3K. The production of PIP-3 in direct intracellular PI-3K enzyme was measured, and the reduction of PIP-3 production in BCAP deficient cells was observed. In addition, the analysis of DT40 cells was carried out in response to PI3Kp 85 stimulation, and the presence of GEM migration on the cell membrane. BCAP was damaged in response to migration. The activation of PI3K is necessary for BCAP, and the activation of PI3K is necessary for BCAP (GEM migration). Cell proliferation, cell death control, PI3K p85 gene cleavage, DT40 cell, p85 gene cleavage, and P55 gene cleavage are discussed directly.