骨髄抑制の少ない新規インターフェロン様蛋白limitinの癌治療への応用

新型低骨髓抑制干扰素样蛋白Limitin在癌症治疗中的应用

• 批准号: 13218077
• 负责人: 織谷 健司
• 金额: $ 4.8万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218077/
• 关键词: Limitin; インターフェロン; 細胞増殖抑制; 免疫応答; 慢性骨髄性白血病; Tリンパ球; 糖蛋白

新規interferon(IFN)様サイトカインLimitinを癌治療の分野において臨床応用することを目的として、recombinat Limitin蛋白の作製と性状解析、Limitinの腫瘍増殖に対する作用や免疫系への作用の解析、およびヒト型Limitin遺伝子の同定を試みた。本研究で申請者らは、CHO細胞にLimitin蛋白を強制発現し、recombinant Limitin蛋白を作製・精製した。Limitin蛋白をWestern blotにより解析し、Limitinの分子量が約20kDであること、Limitinが糖蛋白であること、Limitin蛋白内にS-S結合を有することを確認した。さらに、Limitinがヘパリン結合能を有し、熱や酸に安定であることを見出した。Limitinは多くの血液細胞株に対しapoptosisやG1 arrestを誘導するだけでなく、慢性骨髄性白血病のモデル細胞株(bcr-ab1を遺伝子導入したFDCP-1細胞株)の増殖を著明に抑制した。また、卵白アルブミンを抗原とするT細胞機能解析系を確立し、Limitinがperforin-granzymeを介した細胞障害性Tリンパ球活性をin vitro, in vivoともに増強することを明らかにした。Limitinは腫瘍細胞増殖抑制作用や腫瘍免疫増強作用を持つことより、IFN-αやIFN-βと同様に癌治療効果が期待できることを本研究により確認できた。一方、申請者らは、Limitinが骨髄球前駆細胞や赤芽球前駆細胞の増殖に影響を及ぼさないだけでなく、今回Limitinが造血幹細胞や巨核球前駆細胞の増殖抑制作用がIFN-αと比較して軽微であることを新たに見出した。本研究により、LimitinはIFN-αと比較して骨髄抑制作用が少ないことが確実となった。ヒト型Limitinの同定を試みる際のlibraryのsourceを検討するために、免疫組織やRT-PCRで生体内におけるLimitin産生細胞について解析した。Limitinの産生細胞は、主に成熟Tリンパ球であり、特に胸腺でLimitin遺伝子発現が高いことを見出した。この結果から、ヒト胸腺由来cDNA libraryがヒト型Limitin遺伝子をスクリーニングする際の有力な候補と考えられた。

The new interferon(IFN) gene expression vector and Limitin protein are used in cancer therapy differentiation and clinical application. The recombinat Limitin protein production and characterization, the role of Limitin in tumor proliferation, the role of immune system, and the identification of Limitin protein. In this study, the applicant responded to CHO cell stress to produce Limitin protein, and recombinant Limitin protein was produced and refined. Limitin protein analysis, Limitin molecular weight of about 20kD, Limitin glycoprotein analysis, Limitin protein S-S binding analysis For example, if you want to make a reservation, you can make a reservation. Limitin significantly inhibited the proliferation of multiple blood cell lines induced by apoptosis and G1 arrest, and of a chronic osteoblastic leukemia cell line (FDCP-1 cell line) induced by bcr-ab1 gene transfer. The T cell function analysis system was established, and Limitin-Perforin-Granzyme mediated cell barrier T cell activity in vitro, in vivo, and in vivo. Limitin inhibits tumor cell proliferation and enhances tumor immunity. IFN-α and IFN-β are expected to be effective in cancer treatment. Limitin inhibits the proliferation of hematopoietic stem cells and megakaryocytic progenitor cells. In this study, we compared the inhibitory effect of IFN-α with that of Limitin. Limitin-producing cells are analyzed in vivo by immuno tissue and RT-PCR. Limitin-producing cells, host cells, mature T cells, thymus cells, Limitin-producing cells, mature T cells, and mature T cells. The result is that the cDNA library of thymic origin is a powerful candidate for the study of limiting gene expression.

项目成果

Kouro T et al.: "Characteristics of early murine B-lymphocyte precursors and their direct sensitivity to negative regulators"Blood. 97・9. 2708-2715 (2001)

Kouro T 等人：“早期鼠 B 淋巴细胞前体的特征及其对负调节因子的直接敏感性”Blood.97・9。

Oritani K et al.: "Limitin : an interferon-like cytokine without myelo erythroid suppressive properties"J Mol Med. 79・4. 168-174 (2001)

Oritani K 等人：“Limitin：一种没有骨髓红细胞抑制特性的干扰素样细胞因子”J Mol Med 79·4（2001）。

Yoshida H et al.: "Interaction between SHPS-1 and CD47 mediates the adhesion of human B lymphocytes to non-activated endothelial cells"J Immunol. (in press).

Yoshida H 等人：“SHPS-1 和 CD47 之间的相互作用介导人 B 淋巴细胞与非活化内皮细胞的粘附”JImmunol。

Takahashi I et al.: "A new interferon like cytokine, limitin modulates the immune response without influencing thymocyte-development"J Immunol. 167・6. 3156-3163 (2001)

Takahashi I 等人：“一种新的干扰素样细胞因子，limitin 调节免疫反应而不影响胸腺细胞发育”J Nutrition 167・6 3156-3163 (2001)。

Oritani K et al.: "Type I interferons and limitin : a comparison of structures, receptors, and functions"Cytokine Growth Factor Rev. 12・4. 337-348 (2001)

Oritani K 等：“I 型干扰素和限制素：结构、受体和功能的比较”Cytokine Growth Factor Rev. 12・4 (2001)。