高機能化マイクロチップ電気泳動システムによる糖鎖、リン酸化の全自動解析

点击翻译按钮获取中文摘要

高機能化マイクロチップ電気泳動システムによる糖鎖、リン酸化の全自動解析では、ガンなどの疾病によりタンパク質のリン酸化や糖鎖付加などの翻訳後修飾がどのタイミングでどのように変化するのかを解明する分析手段の開発について検討を行っている。目的とする分析法を開発するためには前処理を含む一連の分析操作を一枚のチップ上で電圧印加のみで達成できる条件の開発が必要となるが、特にターゲットとしている糖鎖やリン酸化などの翻訳後修飾はタンパク質重量から換算すると数%以下であることが多いため、本法を開発するためにはオンラインでの高感度検出に係る前処理を高効率に達成することが必要不可欠になる。本年度はリン酸化ペプチドのオンライン高感度検出に向けてリン酸化化合物を特異的に捕捉することが可能なPhos-tagを含有したアクリルアミドゲルを多分岐マイクロチップの流路にピンポイントで作製することによりリン酸化ペプチドの特異的濃縮、オンライン標識、分離・検出を電圧印加のみで達成できるシステムの検討を行った。市販のリン酸化ペプチドをfluoresceinisothiocyanate(FITC)で蛍光標識したものを試料として用い、マイクロチップの流路交差部に作製したPhos-tagアクリルアミドに電圧を印加して試料を導入した。その結果時間経過とともにPhos-tagアクリルアミドの蛍光強度の増大を確認することができ、特に試料濃度がゲル中に存在するPhos-tagの濃度以下の場合、Phos-tagの濃度依存的に濃縮が起こっていることを確認した。また、糖鎖に関しても糖鎖の認識部位が異なる2種類のレクチンを1枚のマイクロチップに作製することで、レクチンの認識部位に応じた特異的濃縮を実現した。