高機能化マイクロチップ電気泳動システムによる糖鎖、リン酸化の全自動解析

使用功能强大的微芯片电泳系统全自动分析糖链和磷酸化

• 批准号: 20K06993
• 负责人: 山本 佐知雄
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06993/
• 关键词: マイクロチップ電気泳動; リン酸化ペプチド; Phos-tag; アクリルアミドゲル; 糖鎖; リン酸化タンパク質

高機能化マイクロチップ電気泳動システムによる糖鎖、リン酸化の全自動解析では、ガンなどの疾病によりタンパク質のリン酸化や糖鎖付加などの翻訳後修飾がどのタイミングでどのように変化するのかを解明する分析手段の開発について検討を行っている。目的とする分析法を開発するためには前処理を含む一連の分析操作を一枚のチップ上で電圧印加のみで達成できる条件の開発が必要となるが、特にターゲットとしている糖鎖やリン酸化などの翻訳後修飾はタンパク質重量から換算すると数%以下であることが多いため、本法を開発するためにはオンラインでの高感度検出に係る前処理を高効率に達成することが必要不可欠になる。本年度はリン酸化ペプチドのオンライン高感度検出に向けてリン酸化化合物を特異的に捕捉することが可能なPhos-tagを含有したアクリルアミドゲルを多分岐マイクロチップの流路にピンポイントで作製することによりリン酸化ペプチドの特異的濃縮、オンライン標識、分離・検出を電圧印加のみで達成できるシステムの検討を行った。市販のリン酸化ペプチドをfluoresceinisothiocyanate(FITC)で蛍光標識したものを試料として用い、マイクロチップの流路交差部に作製したPhos-tagアクリルアミドに電圧を印加して試料を導入した。その結果時間経過とともにPhos-tagアクリルアミドの蛍光強度の増大を確認することができ、特に試料濃度がゲル中に存在するPhos-tagの濃度以下の場合、Phos-tagの濃度依存的に濃縮が起こっていることを確認した。また、糖鎖に関しても糖鎖の認識部位が異なる2種類のレクチンを1枚のマイクロチップに作製することで、レクチンの認識部位に応じた特異的濃縮を実現した。

High-performance electrophoretic electrophoretic equipment, automatic analysis of sugar, acidizing, and acid treatment of diseases. After the modification of the chemical, the chemical analysis was performed and the analytical method was used. The purpose of this paper is to conduct a comprehensive analysis method, which contains an analytical operation that requires an electronic printing of the computer on the computer to determine the necessary conditions. Special attention should be paid to sugar acidification after refurbishment. The weight balance is less than one percent of the total temperature. In this law, it is necessary to make sure that the rate of high sensitivity is higher than that of the general public. This year's acidizing

项目成果

光硬化性アクリルアミドのピンポイント合成技術を 用いるマイクロチップ電気泳動の高機能化

利用光固化丙烯酰胺的精确合成技术提高微芯片电泳的功能

• 发表时间: 2020
• 作者: Komatsu Masaya;Tsukahara Hayato;Bai Hanako;Takahashi Masashi;Wakai Takuya;Kawahara Manabu;山本佐知雄
• 通讯作者: 山本佐知雄

多分岐マイクロチップとレクチン固定化アクリルアミドゲルを用いる糖鎖のアフィニティーマイクロチップ電気泳動法の開発

使用多分支微芯片和凝集素固定丙烯酰胺凝胶开发聚糖亲和微芯片电泳方法

• 发表时间: 2022
• 作者: 村山周平;立堀華奈子;竹村今日子;加藤大;山本佐知雄，鮎川立希，鈴木茂生，木下充弘
• 通讯作者: 山本佐知雄，鮎川立希，鈴木茂生，木下充弘

Chromatographic Performance of an Amine/amino-bonded Column and a Monolithic Reversed-Phase Column for the Separation of Fluorescently Labeled Glycoprotein Glycans

用于分离荧光标记的糖蛋白聚糖的胺/氨基键合柱和整体反相柱的色谱性能

• DOI: 10.15583/jpchrom.2021.005
• 发表时间: 2021
• 期刊: CHROMATOGRAPHY
• 影响因子: 1.7
• 作者: HIOKI Maho;KOBAYASHI Hiroshi;KINOSHITA Mitsuhiro;YAMAMOTO Sachio;SUZUKI Shigeo
• 通讯作者: SUZUKI Shigeo

<i>In Situ </i>Photopolymerization of Functionalized Polyacrylamide-Based Preconcentrators for Highly Sensitive Specific Detection of Various Analytes by Microchip Electrophoresis

功能化聚丙烯酰胺基预浓缩器的原位光聚合用于通过微芯片电泳对各种分析物进行高灵敏度特异性检测

• DOI: 10.15583/jpchrom.2020.020
• 发表时间: 2021
• 期刊: CHROMATOGRAPHY
• 影响因子: 1.7
• 作者: Y. Ichimaru;M. Imai;H. Fujioka;T. Koike;H. Kurosaki;and K. Kato;YAMAMOTO Sachio
• 通讯作者: YAMAMOTO Sachio

タンパク質固定化アクリルアミドゲルチップを用いる糖鎖の簡易調製と構造解析法の開発

蛋白质固定化丙烯酰胺凝胶芯片糖链简单制备及结构分析方法的开发

• 发表时间: 2021
• 作者: 山本 佐知雄;加藤 奈帆;和田 美希;木下 充弘;鈴木 茂生
• 通讯作者: 鈴木 茂生