細胞膜マイクロチップを利用した膜タンパク質のハイスループットな網羅的解析法の実現

利用细胞膜微芯片实现膜蛋白高通量综合分析方法

• 批准号: 20K15142
• 负责人: 田口 裕也
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K15142/
• 关键词: 膜マイクロチップ; 無細胞タンパク質合成系; 一分子測定; 無細胞発現

本研究では、膜タンパク質の機能解析として強力な「細胞膜マイクロチップ技術」と網羅的解析に有効な手法である「無細胞タンパク質合成系」を組み合わせることで、これまで不可能であった「膜タンパク質のハイスループットな網羅的解析」を可能とする新技術の開発を試みていた。この開発により、「より生体に近い状態で行う分子レベルでの遺伝子変異と機能の相関付け」が可能となり、これまでに明らかにされていなかった、膜タンパク質変異と表現型(疾患)の相互関係解明が期待された。本研究は申請者の一身上の都合により、初年度の前半を経過した時点で事業廃止となった。そのため、本稿にはそれまでに得られた実績を記載する。初年度には、微小試験管に1遺伝子を導入しタンパク質を発現する系を構築することを予定していた。申請時点では水溶性のタンパク質、アルカリフォスファターゼ(ALP)で予備検討を終えていたため、他の水溶性タンパク質や膜タンパク質にも適用可能か検討することが必要であった。その検討に先立ち、無細胞タンパク質発現系の因子を調整することで、より1分子測定に適した条件が期待できると予想できたため、無細胞タンパク質合成系の条件最適化をバルクで行うことから始めた。その結果、各因子の濃度・バッファー条件を変更することで、ある時間における無細胞タンパク質合成系によるタンパク質の発現数をコントロールすることに成功した。このことから、指定された濃度でなくとも無細胞タンパク質合成系は十分に機能することが分かり、膜マイクロチップ内で同様の検討を行うことで、微小試験管内に1分子のみが発現されている状況をコントロール可能であることが示唆された。事業廃止時には本発現条件を膜マイクロチップ内で再現することを試みている段階であった。

In this study, we are able to analyze the characteristics of the network of "cell membrane technology". There are some problems in the analysis of the network, such as the combination of technology and technology, the analysis of the network, and the analysis of the network. In the current state of health and health, the molecules in the industry are in a position to pay for each other. It is possible to pay for each other, and to make sure that they do not know how to treat each other, and that they are expected to understand each other. In this study, all the applicants were in good health, and the business situation was stopped after the first half of the first half of the year. I am sorry to hear that. I am afraid that I will be able to write down your notes. At the beginning of the year, the number of students in the first year of the year, the micro-test system, the number of students, the number of students in the first year. At the time of application, the water-soluble temperature is sensitive, the water-soluble temperature is high, the temperature is high, the temperature is very high, the water-soluble temperature is very high, and the water-soluble temperature is very high. When you apply for the application, you need to use the water-soluble temperature sensor (ALP) to determine the temperature of the water-soluble membrane. This is the first step in the analysis of the factors, the determination of the molecular parameters, the determination of the conditions, the expectation of the conditions, and the optimization of the conditions for the synthesis of the synthetic system. The results of the test, the factors of each factor, the temperature of each factor, the number of factors, the number of factors, In the system of synthesis, the system is very sensitive, the membrane is the same as the system, and the molecular weight in the micro-tube may indicate that there is a problem in the system. At the end of the business, you will see that there will be a lot of trouble during the period of the operation.