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BDNF遺伝子活性化機構の解明と活性化薬剤スクリーニング法の開発

BDNF基因激活机制的阐明及激活药物筛选方法的开发

基本信息

批准号：
13771378
负责人：
田渕明子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、神経細胞の生存維持や機能に関わるニューロトロフィンである脳由来神経栄養因子(BDNF)の遺伝子発現制御機構を解明し、BDNF遺伝子活性化薬剤スクリーニング法を確立することを目指している。なお、本研究は、初代培養大脳皮質ニューロンを用い、ルシフェラーゼレポーターベクターの遺伝子導入を主な手法として取り入れている。本年度の研究実績は次の通りである。1.BDNF遺伝子プロモーターIの脱分極に応答するエレメントの同定 BDNF遺伝子の4つのプロモーターのうち、プロモーターI(P-I)には、2つの異なる(proximal&distal)領域に応答エレメントが存在している。このうちのproximal領域内へ変異導入を行い、その転写活性を測定した。その結果、cAMP responsive element(CRE)様配列とその周辺数塩基が重要であることを明らかにした。2.P-I活性化に関与する転写制御因子の同定 1.によって明らかとなった領域をプローブにしてゲルシフト法を行った。その結果、CREに結合できる因子、特にATF/CREBファミリーに属する因子とupstream stimulatory factor(USF)の両者が結合していることが明らかとなった。これらのdominant negative変異体の過剰発現実験から両者がP-I活性化に関与しているという結果もすでに得ている。3.転写制御因子を活性化するシグナル伝達分子の解析 MAPキナーゼカスケードの阻害剤を添加することにより、脱分極によるCa^<2+>シグナリングがMAPキナーゼを介してP-I活性化を惹起していることが示唆された。

This study aims to clarify the regulatory mechanism of neurotrophic factor (BDNF) gene expression and establish a method for the activation of BDNF gene. In this study, the primary culture of large cortical cells was used to introduce the gene into the medium. This year's research achievements are in the second place. 1. The BDNF gene expression in the region of polarization and depolarization of the BDNF gene expression. Changes in this field are introduced and the writing activity of the company is measured. cAMP responsive element(CRE) 2.P-I activation related to the determination of the control factor 1. The results of CRE, CR The dominant negative has been found to be related to the activation of P-I. 3. The activation of the control factor is mediated by the activation of the P-I molecule.