受容体の提示発現系と光化学的パニング法の開発

受体展示表达系统及光化学淘选方法的开发

• 批准号: 13771410
• 负责人: 定金 豊
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771410/
• 关键词: 光アフィニティーラベル; ジアジリン; ハイスループット; 糖鎖結合タンパク質; ペプチド結合タンパク質; DNA結合タンパク質; プロテオミクス; フォト・パニング; 受容体発現系

[本研究での成果](1)固相集積型・パニング素子の合成法確立我々が独自に提唱する「光化学的パニング法」は、低分子リガンドの受容体タンパク質クローニング法である。新しいプロテオオーム解析法としてハイスループット化を目指すためには、固相上での取扱いが必須となる、そこで、3種類の集積型固相を設計し、それらの合成法を確立した。(2)糖鎖、ペプチド、DNAの光反応性プローブの合成法確立光反応性プローブは、光反応基ジアジリンから生じる高反応種カルベンが相手分子と共有結合するという性質をもつ、この共有結合により以後の解析が容易となる。生理的に重要な3つの低分子リガンドについて、効率的な光反応性プローブを合成する方法を確立した。光反応性アミノ酸の合成法確立で、簡単に光反応性ベプチドを製作できるようになった。また、S化オリゴを利用して一段階で、光反応性DNAを合成する方法も確立した。(3)糖鎖およびペプチドを集積したパニング素子でのスクリーニング法の確立糖鎖(LacNAcなど)および、ベプチド(エンケファリンなど)で製作した集積型光反応性パニング素子の利用により、従来法に比べ以下の点で優れていることを確認した。(1)高速で簡便な解析が可能(2)固相上のパニング素子で様々なリガンドの同時解析が可能(3)光反応基「ジアジリン」の特性による選択性の向上[まとめ]糖鎖、ペプチド、DNAへと生理的に重要なリガンドについて、光反応性プローブとして利用できるようになり、本研究の潜在能力を、幅広い分野の研究領域に拡大できた。さらに、光反応基ジアジリンがもつ特性を生かしてスクリーニングの効率も上昇することが確認できた。プロテオーム解析法として、多品種を同時に解析できる本方法が貢献する足がかりを、本研究は築いたといえよう。低分子リガンドの受容体タンパク質クローニング法の強力なツールとして、今後も本方法を活用していきたい。

[Results of this research] (1) Solid-phase integration type・Bonoko's synthesis method has been established. "Photochemical パニング method", low molecular weight リガンドの acceptor タンパクqualitative クローニング method である. New analytical method of analysis method, solid phase analysis method, solid phase analysis method扱いがIt is necessary to design the integrated solid phase and the synthesis method of the three types of integrated solid phase and establish the synthesis method. (2) Photoreflective biosynthetic method of sugar lock, photoreflective DNA, and DNA to establish photoreflective biochemicals and photoreflective base biosynthetic methods The じるhigh-reaction カルベンがmolecules share the binding property するというをもつ, and the このshared binding によりlater analysis is easy となる. Physiologically important low-molecular-weight materials and efficient light-reflective materials have been established, and the method for synthesizing them has been established. The synthesis method of photoreflective ammonia acid has been established, and the production of photoreflective ammonia acid has been simplified.また, S-based オリゴを utilizes the して first-stage で, photoreflective DNA を synthesis する method has been established した. (3)Sugar locks and sugar locksニング法のEstablishing Sugar Lock (LacNAcなど)および、ベプチド(エンケファリンなど) Made by Integrated Light Reflective Materials Use により, 従来法に比べ下の点で优れていることをconfirmした. (1) High-speed and simple analysis is possible (2) Simultaneous analysis of solid-phase solid phase elements Possibility of analysis (3) Characteristics of photoreflective base 「ジアジリン」による选択性のUP [まとめ] Sugar Lock , DNA, physiological importance, light reflexivity Utilize the potential of this research, the potential of this research, and the wide range of research fields.さらに、Photoreflective baseジアジリンがもつcharacteristicsを生かしてスクリーニングのefficiencyもriseすることがconfirmできた.プロテオームanalytical methodとして、multi-variety simultaneous analysisできるThis method is a contributionする足がかりを、this research is builtいたといえよう. Low molecular weight リガンドの acceptor タンパクquality クローニング method のstrong なツールとして, from now on this method will be used していきたい.

项目成果

Y.Sadakane, H.Nakashima, J.-J.Park, Y.Hatanaka: "PREPARATION OF PANNING CHIP OF PHOTO-AFFINITY PEPTIDE LIGNADS AND APPLICATION TO PHOTO-PANINNG"Photomedicine and Photobiology. 24. 85-86 (2002)

Y.Sadakane、H.Nakashima、J.-J.Park、Y.Hatanaka：“光亲和肽连接体的淘选芯片的制备及其在光淘选中的应用”光医学和光生物学。

Sadakane Y, Nakashima H., Park JJ, Nakagomi K., Hatanaka Y.: "EFFICIENT CLONING OF CARBOHYDRATE BINDING PROTEINS"Photomedicine and Photobiology. 22(in press). (2002)

Sadakane Y、Nakashima H.、Park JJ、Nakagomi K.、Hatanaka Y.：“碳水化合物结合蛋白的高效克隆”光医学和光生物学。

Y.Sadakane, T.Yamazaki, K.Nakagomi, T.Akizawa, N.Fujii, T.Tanimura, M.kaneda, Y.Hatanaka: "Quantification of the isomerization of Asp residue in recombinant αA-crystallin by reversed-phase HPLC"J. Pharm. Biomed. Anal. 30. 1825-1833 (2003)

Y.Sadakane、T.Yamazaki、K.Nakagomi、T.Akizawa、N.Fujii、T.Tanimura、M.kaneda、Y.Hatanaka：“通过反相 HPLC 定量重组 αA-晶状体蛋白中天冬氨酸残基的异构化“J. Pharm. Biomed. Anal. 30. 1825-1833 (2003)

Hatanaka, Y., Sadakane, Y: "Photoaffinity Labeling in Drug Discovery and Developments : Chemical Gateway for Entering Proteomic Frontier"Current Topics in Medicinal Chemistry. 2(3). 271-288 (2002)

Hatanaka, Y., Sadakane, Y：“药物发现和开发中的光亲和标记：进入蛋白质组前沿的化学网关”药物化学当前主题。

K.Nakagomi, K.Takatsu, S.Takagi, H.Ebisu, Y.Sadakane, N.Fujii, T.Akizawa, T.Tanimura, Y.Hatanaka: "Isolation of cathepsin B inhibitory peptides, Cabin-A1 and-A2, from a tryptic and chymotryptic hydrolysate of human serum albumin"Peptides. 23. 1567-1571 (2

K.Nakagomi、K.Takatsu、S.Takagi、H.Ebisu、Y.Sadakane、N.Fujii、T.Akizawa、T.Tanimura、Y.Hatanaka：“组织蛋白酶 B 抑制肽、Cabin-A1 和 -A2 的分离