フォト・パニング法による受容体タンパク質の機能解析

使用摄影平移方法进行受体蛋白的功能分析

• 批准号: 13202023
• 负责人: 定金 豊
• 金额: $ 3.39万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13202023/
• 关键词: 光アフィニティーラベル; ジアジリン; ハイスループット; 糖鎖結合タンパク質; ペプチド結合タンパク質; DNA結合タンパク質; プロテオーム解析; 不斉合成

【研究の目的】フォト・パニング法は、我々が独自に提唱するまったく新しいクローニング法であり、この方法の開発と有用性の実証が達成目標である。光反応基ジアジリンから生じる高反応種カルベンが相手分子と共有結合するという性質を利用したフォト・パニング法は、(1)従来のパニング法に比べて高速で簡便な解析が可能、(2)固相上のパニング素子で多種のリガンドの同時解析が可能、(3)光反応基「ジアジリン」の特性による選択性の向上、などの特徴を持つ。共有結合の有無で選択するというデジタル的選別法であるフォト・パニング法は、新しいプロテオーム解析法として期待できる。【研究の成果】1.固相集積型・光アフィニティー・パニング素子の開発(1)3種類の固相集積型・パニング素子プラットフォームを設計、それら合成法を確立した。(2)糖鎖、およびペプチドをリガンドとする、固相集積型パニング素子の開発に成功した。(3)新しい光反応性ペプチドリガンド製作のための、光反応性フェニルアラニン誘導体の小規模・不斉合成法を確立した。(4)DNAの特定部位にジアジリン型・光アフィニティー・プローブを搭載する方法を確立した。2.受容体提示発現系の開発(5)研究期間が短縮されたため、大腸菌での発現系の開発は見送り、バクテリオファージタンパク質発現系を利用したフォト・パニング法の確立に注力した。(6)特定のタンパク質を発現したファージが、糖鎖およびペプチドをリガンドとする固相集積型パニング素子で、効率的に選択・捕獲されることを確認した。【まとめ】ジアジリン型・光アフィニティー・ラベルを搭載できるリガンドが、糖鎖、ペプチド、DNAへと拡がり、それらと結合するタンパク質を効率的にクローニングする方法の基礎が出来上がった。バクテリオファージタンパク質発現系を利用し、フォト・パニング法の基礎的なノウハウを蓄積した。

【Purpose of research】フォト・パニング法は、我々が一　　　　　　　　　　いクローニング法であり、この法の开発と usefulness の実proofがachieve the goal である. Photoreflective base ジアジリンから生じるHighly reflective カルベンがphase hand molecule とshared binding するというThe nature of the use of したフォト・パニング法は, (1) 従来のパニング法に比べてHigh-speed で SIMPLE (2) It is possible to analyze a variety of のパニング element on the solid phase simultaneously , (3) The characteristics of the photoreflective base "ジアジリン" are the selection of the characteristics of the light and the characteristics of the light reflection base. How to choose whether there is a shared combination or not?・パニング法は、新しいプロテオームanalytic method and としてLooking forward to できる. [Research results] 1. Three types of solid-phase integrated type, Hikari Frozen アフィニティー・パニングprimoko nokai (1) The solid-phase integration type of the class is designed and the synthesis method of the パニングPrimoko プラットフォームを is established. (2) Sugar lock, およびペプチドをリガンドとする, and solid-phase integrated パニング真子の开発に成した. (3) New photoreflective photoreflective biomass production and photoreflective photoreflective biomass derivatives are produced on a small scale and have not been established according to the synthesis method. (4) The specific part of DNA is equipped with a method that is established based on the type and light type of DNA. 2. Receptor prompts that the disease is present (5) During the research period, the disease is shortened and the coliform disease is present. Send り, バクテリオファージタンパク性発出入したフォト・パニング法のestablished attention した. (6) Specific のタンパク性を発appears したファージが, sugar lock およびペプチドをリガンドIt is a solid-phase integrated solid-phase パニングatomic element, and the efficiency of selection and capture is confirmed. 【まとめ】ジアジリン・光アフィニティー・ラベルを is equipped with できるリガンドが, sugar lock, ペプチド, DN The basics of へと拡がり and それらと combined with するタンパクquality and efficiency are based on the にクローニングする method. The バクテリオファージタンパク性発出款し, the フォト・パニング法のbased なノウハウを accumulates した.

项目成果

Sadakane Y, Nakashima H., Park JJ, Nakagomi K., Hatanaka Y.: "EFFICIENT CLONING OF CARBOHYDRATE BINDING PROTEINS"Photomedicine and Photobiology. 22(in press). (2002)

Sadakane Y、Nakashima H.、Park JJ、Nakagomi K.、Hatanaka Y.：“碳水化合物结合蛋白的高效克隆”光医学和光生物学。

Y.Hatanaka, M.Ishiguro, M.Hashimoto, L.N.Gastinel, K.Nakagomi: "A Model of Photoprobe Docking with b1,4-Galactosyltransferase Identify a Possible Carboxylate Involved in Glycosylation Steps"Bioorg.Med.Chem.Left.. 11. 411-413 (2001)

Y.Hatanaka、M.Ishiguro、M.Hashimoto、L.N.Gastinel、K.Nakagomi：“用 b1,4-半乳糖基转移酶进行光探针对接的模型，识别参与糖基化步骤的可能的羧酸盐”Bioorg.Med.Chem.Left.. 11

Hatanaka, Y., Sadakane, Y: "Photoaffinity Labeling in Drug Discovery and Developments : Chemical Gateway for Entering Proteomic Frontier"Current Topics in Medicinal Chemistry. 2(3). 271-288 (2002)

Hatanaka, Y., Sadakane, Y：“药物发现和开发中的光亲和标记：进入蛋白质组前沿的化学网关”药物化学当前主题。

M.Hashimoto, Y.Hatanaka K.Nabeta: "Versatile synthesis of phenoxydiazirine based fatty acid analogues and photoreactive galactosylceramide"Bioorg.Med.Chem.Lett.. 12. 89-91 (2002)

M.Hashimoto、Y.Hatanaka K.Nabeta：“基于苯氧基二氮嗪的脂肪酸类似物和光反应性半乳糖神经酰胺的多功能合成”Bioorg.Med.Chem.Lett.. 12. 89-91 (2002)

M.Hashimoto, Y.Hatanaka, J.Yang, J.Dhesi G.D.Holman: "Synthesis of Biotinylated Bis(D-Glucose) Derivatives for Glucose Transporter Photoaffinity Labelling"Carbohydr. Res.. 331. 119-127 (2001)

M.Hashimoto、Y.Hatanaka、J.Yang、J.Dhesi G.D.Holman：“用于葡萄糖转运蛋白光亲和标记的生物素化双（D-葡萄糖）衍生物的合成”碳水化合物。