脊髄小脳失調症6型脳内で凝集する新規蛋白分子の同定と細胞変性機序の解明

鉴定在脊髓小脑共济失调 6 型大脑中聚集的新型蛋白质分子并阐明细胞变性机制

• 批准号: 13780612
• 负责人: 石川 欽也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780612/
• 关键词: 脊髄小脳失調症6型; 脊髄小脳変性症; 神経変性疾患; カルシウムチャネル; 神経科学; 遺伝子; 分子遺伝学; SCA6; 蛋白工学

本研究では、脊髄小脳失調症6型(SCA6)の患者脳内で凝集する蛋白分子を同定することが目的である。研究代表者らはこれまでに、患者脳内で最も強く変性する小脳Purkinje細胞に限って、2種類の異なる凝集体が形成されることを明らかにしてきた。1種類は原因蛋白であるα1A-カルシウムチャネル蛋白であるが、もう1種類は異常伸長ポリグルタミン鎖を認識する抗体で検出されるポリグルタミン封入体で、その蛋白が何に由来するかは不明であった。このため、本研究ではこの蛋白分子の同定を試みた。最初two-hybrid法でポリグルタミンを有するカルシウムチャネル蛋白とinteractする蛋白分子の同定を試みたが、two-hybridに適したベクターを構築する段階で休止した。一方、同時に進めていたヒトカルシウムチャネル蛋白に対する新しいポリクローナル抗体作製の試みでは、3種類の抗体作製を計画し、このうち1種類で実際に新しい抗体を作製することが早期に出来た。培養細胞でのrecombinant蛋白の発現を確認し、抗体の特異性を確認した。これまでにヒト対照脳およびSCA6患者脳でウエスタン・ブロットを行い、SCA6患者脳では変異蛋白の量が減少していないことを報告した。さらに、患者Purkinje細胞に新しい抗体でも凝集体を確認した。その形態や細胞内の分布様式はポリグルタミン封入体とかなり類似しており、一部はこれまでに報告してきたカルシウムチャネル封入体とも共通していた。以上の結果より、当初同定する目的であった新規蛋白分子は、チャネル蛋白から断片化された蛋白である可能性が高いことが明らかになった。

This study で は, small spinal marrow 脳 disorder in patients with type 6 (SCA6) の 脳 within で agglutination す る を protein molecules with fixed す る こ と が purpose で あ る. Research representatives ら は こ れ ま で に, patient 脳 inside the most strong も く で す - sex る small 脳 Purkinje cells に limit っ て, 2 kinds の different な る coagulation collective が form さ れ る こ と を Ming ら か に し て き た. 1 species は reason protein で あ る alpha 1 a - カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル protein で あ る が, も う 1 species は abnormal elongation ポ リ グ ル タ ミ ン lock を know す る antibody で 検 out さ れ る ポ リ グ ル タ ミ ン で seal in body, そ の protein が what に origin す る か は unknown で あ っ た. Youdaoplaceholder1 ため ため, in this study, the protein molecule で is determined by を test みた. First two hybrid method で ポ リ グ ル タ ミ ン を have す る カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル protein と interact す る の protein molecules with fixed を try み た が, two hybrid に optimum し た ベ ク タ ー を build す る Duan Jie で resting し た. One party, at the same time に into め て い た ヒ ト カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル protein に す seaborne る new し い ポ リ ク ロ ー ナ ル の try the antibody cropping み で は, 3 kinds の antibodies for を plan し, こ の う ち 1 species で be interstate に new し い す the antibody を cropping る こ と が early に た. The appearance of で <s:1> recombinant protein <e:1> in cultured cells を confirms <s:1>, and the specificity of antibody <s:1> を confirms <s:1> た. こ れ ま で に ヒ ト polices according to 脳 お よ び SCA6 patients 脳 で ウ エ ス タ ン · ブ ロ ッ ト を い, patients with SCA6 脳 で は - different protein の decrease が し て い な い こ と を report し た. Youdaoplaceholder0, に of the patient 's Purkinje cells, a new <s:1> <s:1> antibody で を coagulation group を, confirmed <s:1> た. そ の form others の や cell distribution type は ポ リ グ ル タ ミ ン seal in body と か な り similar し て お り, a は こ れ ま で に report し て き た カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル seal in body と も common し て い た. Results above の よ り, at the beginning with す る purpose で あ っ た new rules は protein molecules, チ ャ ネ ル protein か ら fragment turn さ れ た protein で あ likely が る い こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

T.Tsunami, H.Saegusa, K.Ishikawa, et al.: "Novel Cav.2.1 splice variants isolated from Purkinje cells do not generate P-type Ca^<2+> current"Journal of Biological Chemistry. 276.52. epub (2001)

T.Tsunami、H.Saegusa、K.Ishikawa 等人：“从浦肯野细胞中分离出的新型 Cav.2.1 剪接变体不会产生 P 型 Ca^2 当前”《生物化学杂志》。

Kubodera T., Yokota T., Owada K., Ishikawa K., et al.: "Proteolytic cleavage and cellular toxicity of the human aplha1A-calcium channel In spinocerebellar ataxia type 6"Neuroscience Letter. (in press). (2003)

Kubodera T.、Yokota T.、Owada K.、Ishikawa K. 等人：“脊髓小脑共济失调 6 型中人 aplha1A-钙通道的蛋白水解裂解和细胞毒性”神经科学快报。

K.Ishikawa, et al.: "Cytoplasmic and nuclear polyglutamine aggregates in SCA6 Purkinje cells"Neurology. 56. 1753-1756 (2001)

K.Ishikawa 等人：“SCA6 浦肯野细胞中的细胞质和核聚谷氨酰胺聚集体”神经病学。

M.Takashima, K.Ishikawa, et al.: "A linkage disequilibrium at the candidate gene locus for 16q-linked autosomal dominant cerebellar ataxia type III in Japan"Journal of Human Genetics. 46. 167-171 (2001)

M.Takashima、K.Ishikawa 等人：“日本 16q 连锁常染色体显性小脑性共济失调 III 型候选基因座的连锁不平衡”人类遗传学杂志。