抗体遺伝子を用いた神経機能解析法の開発

使用抗体基因的神经功能分析方法的开发

• 批准号: 13780608
• 负责人: 樺山 博之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780608/
• 关键词: 抗体遺伝子; 神経突起伸長; 神経伝達物質の放出機構; シナプトタグミン; 成長円錐; 神経伝達物質放出

シナプトタグミン1はシナプス小胞に局在する膜タンパクで、Ca2+依存性の神経伝達物質の放出過程を制御する。また、シナプトタグミン1は神経突起伸長時の成長円錐小胞にも局在する。本研究は今までにカルシウム依存性の神経伝達物質放出に関与するシナプトタグミンの機能ドメインであるC2Aドメインに対する抗体遺伝子を単離ずみで、その細胞内発現により神経突起伸長を抑制出来る事を示していた。しかしこの阻害活性が、シナプトタグミンのC2Aドメインに抗体が結合することによるかを明らかにするためには、C2Aドメインに結合できない変異型抗体遺伝子の単離が必要であった。そこでPCRを用いた突然変異導入法により、シナプトタグミンのC2Aドメインに結合できない変異抗体遺伝子を単離した。シナプトタグミン1/2はカルシウム依存性の神経伝達物質の放出過程を制御する分子であるが、この機能を単離した抗体遺伝子が抑制するかをPC12細胞を用いて検討した。変異型抗体遺伝子と比較して、有為にカルシウム依存性の神経伝達物質の放出過程を阻害することが明かとなった。抗体遺伝子はGFP融合蛋白質として発現が可能であり、また、これら抗体遺伝子を神経細胞特異的であるp35プロモーターを用いて初代培養DRGニューロンに安定に発現させることが可能になった。野生型抗体遺伝子の発現は変異型と比べ有為に神経突起伸長を阻害する事が分かり、これらの抗体遺伝子がシナプトタグミンの機能解析のための強力なツールとなる事が明かとなった。神経突起伸長には細胞膜の膜面積の増大が必要とされる。この膜面積の増大には恒常的な成長円錐小胞の細胞膜への融合が関与するとされており、この過程をシナプトタグミン1/2のC2Aドメインが制御している可能性が考えられる。従って、上記の抗体遺伝子を用いた解析法は機能が既知の分子の新たな機能を探索するうえで非常に有効であると考えられ、今後様々な分子の機能解析に応用されると期待される。

The シナプトタグミン1 はシナプス小cell bureau is controlled by the する membrane タンパクで and the Ca2+-dependent の神経伝reach material release process.また、シナプトタグミン1は神経 protrusion elongates when the growth of the cone cells is in the する. This study focuses on the dependence of the current material on the material release and the function of the material release C2 Aドメインに対するAntibody を単ずみで、その intracellular disease appears により神経 protrusion elongation を suppresses it る事をshows していた.しかしこのBlocking activity が, シナプトタグミンのC2A ドメインにantibody がbinding することによるかを明らかにするためには、C2A ドメインに合できない変 isotype antibody leaving the necessary であった.そこでPCRをいたsudden change introduction method により、シナプトタグミンのC2A ドメインに combines できない変 isoantibodies 缝子を単利した.シナプトタグミン 1/2 はカルシウムdependence の神経伝达matter release process をcontrol するmolecule でThe function of あるが and the このfunctional を単したantibody is suppressed by するかをPC12 cells. The allotype antibody remains the same and the substance is dependent on the substance and hinders the release process of the substance. Antibody remains 伝子は GFP fusion protein として発 appear が であり、また、これらAntibody legacy 伝子 を神経 cell-specific であるp35 プロモーターを Use いて first generation to cultivate DRG ニューロンに stabilization に発existing させることがpossible になった. The wild-type antibody has a different type and is different from the original type.のantibody legacy 伝子がシナプトタグミンの Functional Analysis のためのPowerful なツールとなる事が明かとなった. It is necessary for the elongation of the nerve ridges to increase the membrane area of ​​the cell membrane. The membrane area increases, the constant growth of the cone cells, the fusion of the cell membrane, and the relationship between the membrane area and the membrane area.このprocessをシナプトタグミン1/2のC2Aドメインがcontrolしているpossibilityがtestえられる.従って、The above-mentioned antibody legacy そ子をutilization いたanalytical method はfunction がknown molecule のnew たなfunction をexploration するうIt is very effective and is very effective. I am looking forward to analyzing the functional properties of molecules in the future.