高頻度で相同組換えを起こすB細胞株を用いた多重遺伝子ファミリーの機能解析

使用高频同源重组的 B 细胞系进行多基因家族的功能分析

• 批准号: 13876068
• 负责人: 後飯塚 僚
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13876068/
• 关键词: 相同組換え; 免疫; ニワトリ

ニワトリのファブリシウス嚢B細胞特異的に発現するchB1分子は、哺乳類CD72と最も高い相同性を示すC-type lectinファミリー分子である。今回、我々はchB1遺伝子の近傍にCD72と高い相同性を有する分子をコードする新たなchB1類似遺伝子(chB1-related;chB1r)が存在することを見いだした。本遺伝子がコードするchB1r分子は分子量約45kDaの蛋白であり、アミノ酸レベルでchB1と48%、マウスCD72と28%の相同性を有していた。遺伝子構造においては、chB1r遺伝子に比べ、chB1遺伝子の方がよりCD72遺伝子と類似した構造上の特徴を有していたが、chB1分子が細胞質内領域に1個しかITIMを有しないのに対し、chB1r分子はCD72との間で高度に保存された2個のITIMを有していた。また、chB1の発現がファブリシウス嚢B細胞ならびにDT40細胞のような未熟B細胞殊に限局しているのに対し、chB1rはより広汎なリンパ組織(ファブリシウス嚢、脾臓、骨髄)および成熟B細胞株でも発現していることから、発現様式においてもchB1rの方がCD72に類似しているものと考えられた。さらに、chB1r分子は、B細胞抗原レセプター(BCR)刺激に伴いチロシンリン酸化され、2個のITIMに変異を入れることにより、そのリン酸化が消失することから、CD72同様、そのITIMを介してBCRシグナル伝達に関与することが示唆された。そこで、高頻度で相同組み換えの起こるニワトリB細胞株DT40を用いて、chB1rおよびchB1を単独あるいは両方欠損したDT40細胞を作製した。さらに、chB1/chB1rを双方欠損した細胞に変異型chB1rならびにchB1を再導入し、BCRシグナル伝達におけるこれら分子の機能の詳細な解析を行っている。

The detection of chB1 molecules in mammalian cells and the most high-level similarity of CD72 in mammals indicate that C-type lectin molecules are highly similar. This time, we are close to chB1. There are some molecular similarities, new chB1-like chB1-related;chB1r, and so on. The molecular weight of chB1r molecule is about 45kDa protein protein, the molecular weight of protein is 48%, the molecular weight of CD72 is 28%, and the homology is similar. It is possible to create a cluster, a chB1r cluster, a chB1 cluster, a CD72 cluster, a special cluster, a local ITIM in the field of the chB1 molecular cluster, an unregistered ITIM, and an chB1r molecular. The CD72 cluster height store has a cluster in 2 ITIM users. The results show that the DT40 cell line is not mature, and the CD72 type of the mature B cell line is similar to that of the mature B cell line, which is different from that of the mature B cell line, which is different from that of the mature B cell line, the CD72 type of the mature B cell line is similar to that of the mature cell line. ChB1r molecules, B cell antigens (BCR) stimuli, two ITIM molecules, two acidified cells, no acid molecules, CD72 cohorts, ITIM molecules, BCR antigens, antigens. In the same system of high temperature and high temperature, the cell line DT40 of high temperature and high temperature was used to treat the cell line DT40, and the DT40 cell line was not used in the absence of DT40 cell line. There is a shortage of information on both sides of the chB1/chB1r and the chB1/chB1r. The reentry of the chB1rDNA, the chB1, the reentry of the chB1rDNA, the reentry of the BCR, the molecular energy analysis and the analysis of the molecular mechanism are not available.