高頻度で相同組換えを起こすB細胞株を用いた多重遺伝子ファミリーの機能解析

使用高频同源重组的 B 细胞系进行多基因家族的功能分析

• 批准号: 13876068
• 负责人: 後飯塚 僚
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13876068/
• 关键词: 相同組換え; 免疫; ニワトリ

ニワトリのファブリシウス嚢B細胞特異的に発現するchB1分子は、哺乳類CD72と最も高い相同性を示すC-type lectinファミリー分子である。今回、我々はchB1遺伝子の近傍にCD72と高い相同性を有する分子をコードする新たなchB1類似遺伝子(chB1-related;chB1r)が存在することを見いだした。本遺伝子がコードするchB1r分子は分子量約45kDaの蛋白であり、アミノ酸レベルでchB1と48%、マウスCD72と28%の相同性を有していた。遺伝子構造においては、chB1r遺伝子に比べ、chB1遺伝子の方がよりCD72遺伝子と類似した構造上の特徴を有していたが、chB1分子が細胞質内領域に1個しかITIMを有しないのに対し、chB1r分子はCD72との間で高度に保存された2個のITIMを有していた。また、chB1の発現がファブリシウス嚢B細胞ならびにDT40細胞のような未熟B細胞殊に限局しているのに対し、chB1rはより広汎なリンパ組織(ファブリシウス嚢、脾臓、骨髄)および成熟B細胞株でも発現していることから、発現様式においてもchB1rの方がCD72に類似しているものと考えられた。さらに、chB1r分子は、B細胞抗原レセプター(BCR)刺激に伴いチロシンリン酸化され、2個のITIMに変異を入れることにより、そのリン酸化が消失することから、CD72同様、そのITIMを介してBCRシグナル伝達に関与することが示唆された。そこで、高頻度で相同組み換えの起こるニワトリB細胞株DT40を用いて、chB1rおよびchB1を単独あるいは両方欠損したDT40細胞を作製した。さらに、chB1/chB1rを双方欠損した細胞に変異型chB1rならびにchB1を再導入し、BCRシグナル伝達におけるこれら分子の機能の詳細な解析を行っている。

在鸡肉纤维胶囊B细胞中专门表达的CHB1分子是一种C型凝集素家族分子，与哺乳动物CD72表现出最高的同源性。在这里，我们发现有一个新的CHB1样基因（与CHB1相关的; CHB1R），该基因编码CHB1基因附近具有高同源性CD72的分子。该基因编码的CHB1R分子是一种分子量约为45 kDa的蛋白质，在氨基酸水平上与CHB1具有48％同源性，与小鼠CD72同源性为28％。在遗传结构中，CHB1基因的结构特征与CD72基因相似，而CHB1R基因的结构特征类似，但是CHB1分子在胞质内区域中只有一个ITIM，而CHB1R分子具有两个高度保存的ITIM，带有CD72。此外，虽然CHB1表达特别限于未成熟的B细胞，例如Fabrician SAC B细胞和DT40细胞，但CHB1R在淋巴组织（Fabrician Sac，Spleen，Spleen，骨髓）和成熟的B细胞系中更广泛地表达，并且认为CHB1R与CD72在其表达模式下相似。此外，CHB1R分子是在B细胞抗原受体（BCR）刺激上磷酸化的酪氨酸，当将两个ITIM放置在突变中时，磷酸化消失，表明它们通过ITIM与ITIM相似，与CD72相似。因此，使用CHB1R和CHB1的DT40细胞使用Chicken B细胞系DT40产生，该细胞经历了高频率同源重组。此外，将突变的CHB1R和CHB1重新引入了CHB1/CHB1R缺乏的细胞中，对这些分子在BCR信号传导中的功能进行了详细分析。