TLS-/-マウスを用いたTLS標的遺伝子の単離

使用 TLS-/- 小鼠分离 TLS 靶基因

• 批准号: 13770098
• 负责人: 黒田 雅彦
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770098/
• 关键词: TLS; 減数分裂; パキテン期; DNA chip

TLS遺伝子(translocated liposarcoma)は、粘液型脂肪肉腫における染色体の相互転座において、CHOP遺伝子と融合する遺伝子として単離された。本遺伝子は、ユーイング肉腫(ES)及びPNET、骨外性粘液型軟骨肉腫において同様なキメラ癌遺伝子を形成するEWS遺伝子、TAF1168遺伝子と非常に高い相同性を有するRNA結合蛋白である。TLS遺伝子の生理的な機能は不明であったがジーンターゲテイング法によりTLS遺伝子を欠失したマウスを作成し、TLS遺伝子産物がRNA結合蛋白として相同的なDNAのpairing、減数分裂に関与する可能性を見出した。昨年度の研究では、まずTLS遺伝子を欠失したマウスより胎児線維芽細胞(MEF細胞)を作成し、TLS-/-MEF細胞とTLS+/+MEF細胞とでcDNA Representational Difference Analysis(RDA)を行ったが、両者で発現に差のある遺伝子は同定できなかった。このようなことから、マウスの精巣より、減数分裂期であるパキテン期の細胞を分離しcDNAライブラリーを作製し、それを用いTLS遺伝子の標的遺伝子を単離することを検討した。このcDNAライブラリーには減数分裂期のDNA相同組み換えに関与する遺伝子が濃縮されている。今年度は昨年度に続き、この遺伝子ライブラリーのEST化を行いクローンのシークエンスを行った。また、この減数分裂特異的遺伝子ライブラリーより、500遺伝子をガラスアレイ上にスポットを行いcDNAマイクロアレイを作製した。現在このパキテン期特異的cDNAマイクロアレイを用いTLS遺伝子の標的遺伝子の単離を行っている。また、同時にマイクロアレイの特異性をあげるため、cDNAではなく30merのオリゴヌクレオチドを使用したマイクロアレイの作製も同時に行っている。

Traces of TLS 伝 child (translocated liposarcoma) は, mucous type of fat meat, swollen に お け る chromosome の planning each seat に お い て, CHOP but 伝 と fusion す る heritage 伝 son と し て 単 from さ れ た. This heritage 伝 は, ユ ー イ ン グ meat is swollen (ES) and び sex outside of PNET, bone mucus type soft flesh swelling に お い て with others な キ メ ラ carcinoma heritage 伝 son を form す る EWS heritage 伝, TAF1168 heritage 伝 son と に gay を い phase has very high す る rna-binding protein で あ る. TLS posthumous son 伝 の physiological function of な は unknown で あ っ た が ジ ー ン タ ー ゲ テ イ ン グ method に よ り TLS heritage 伝 を owe son lost し た マ ウ ス を make し, TLS heritage 伝 zi chan content が rna-binding protein と し て same な DNA の pairing, meiosis に masato and す る を likely see a し た. Yesterday's annual の research で は, ま ず TLS heritage 伝 を owe son lost し た マ ウ ス よ り tire line where d bud cells (MEF) を make し, TLS - / - + / + MEF と TLS MEF cells と で cDNA Representational Difference Analysis (RDA) line を っ た が, struck で 発 now poor に の あ る heritage 伝 は son be で き な か っ た. こ の よ う な こ と か ら, マ ウ ス の fine 巣 よ り, meiosis で あ る パ キ テ ン period の を isolated し cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を as し, そ れ を with い TLS heritage 伝 child の mark but 伝 を 単 from す る こ と を beg し 検 た. こ の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー に は meiosis の み DNA same group in え に masato and す る posthumous son 伝 が enrichment さ れ て い る. Our annual に は yesterday 続 き, こ の heritage 伝 son ラ イ ブ ラ リ ー の EST change line を い ク ロ ー ン の シ ー ク エ ン ス を line っ た. Specific heritage ま た, こ の meiosis 伝 son ラ イ ブ ラ リ ー よ り, 500 survived 伝 を ガ ラ ス ア レ イ on に ス ポ ッ ト を line い cDNA マ イ ク ロ ア レ イ を cropping し た. Now こ の パ キ テ ン phase specific cDNA マ イ ク ロ ア レ イ を with い TLS heritage 伝 child の mark but 伝 の 単 line from を っ て い る. ま た, at the same time に マ イ ク ロ ア レ イ の specificity を あ げ る た め, cDNA で は な く 30 killing の オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を use し た マ イ ク ロ ア レ イ の cropping も line at the same time に っ て い る.

项目成果

Ogawa H, Kuroda M, et al.: "Expression of CD10 by stromal cells during colorectal tumor development"Human Pathol. 33・8. 806-811 (2002)

小川 H、黑田 M 等：“结直肠肿瘤发生过程中基质细胞的 CD10 表达”人类病理学 33・811（2002）。

Kuroda M, et al.: "Effects of TCDD on Mitosis and Meiosis"Environmental Sciences. 10・Suppl. 69-76 (2003)

Kuroda M 等人：“TCDD 对有丝分裂和减数分裂的影响”环境科学 10·增刊 69-76（2003）。