角膜透明性に関するクロライドチャネルの役割の研究

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CLCA2は新規クロライドチャンネルである。角膜上皮細胞の発現解析によってこの細胞で少なからぬ量のCLCA2が発現、機能していることが推測されていた。このことを調べるため、まずCLCA2に対するペプチド抗体を作成した。作成した抗体の特異性、反応性を調べたところ、この抗体は三次元構造をとった天然体のCLCA2に特異的に反応することがわかった。次にこの抗体を用いて眼表面上皮を含む上皮組織におけるCLCA2の発現を調べた。結果としてCLCA2は重層扁平上皮の基底細胞の基底側に極めて特異的に発現していることがわかった。この結果はCLCA2が重層扁平上皮で特に重要な働きをしていることを示唆するもので、乳腺上皮や肺、気管上皮に多く発現しているとするこれまでの報告を覆すものであった。このことをさらに確認するため、リアルタイムRT-PCRによって上皮基底層での際だった発現分布はCLCA2と基底膜構成成分との関係を示唆していた。そこでCLCA2と基底膜構成成分であるインテグリンα6/β4との関係を調べたところ、CLCA2とこれらの成分は免疫染色および免疫電顕にて一致していることが確認され、機能的な関連が示唆された。次にCLCA2の角膜上皮細胞における機能を調べるために、CLCA2イオンチャンネルの阻害剤であるNPPBを培養角膜上皮細胞に与えたところ、コントロールに比べて有意な細胞増殖の抑制が見られた。これらの結果よりCLCA2は細胞接着、細胞増殖に関連する多機能イオンチャネルである可能性が示唆された。