ヒト角膜特異的マイクロアレイの開発による角膜疾患の分子病態の解明

通过开发人类角膜特异性微阵列来阐明角膜疾病的分子病理学

• 批准号: 12204090
• 负责人: 木下 茂
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204090/
• 关键词: 角膜上皮; マイクロアレイ; 円錐角膜; ヒト; 遺伝子発現解析; 特異的な遺伝子

我々は角膜に発現している遺伝子の分子構成(種類と量)の詳細なデータを独自に作成し蓄積してきた。本研究においては、このデータをもとに角膜特異的なマイクロアレイを作成し、円錐角膜と正常角膜における遺伝子の発現量比較の大規模解析を行う。最終的にはアトピー素因との関連を含め、円錐角膜の原因遺伝子、修飾遺伝子を明らかにし、早期発見のためのスクリーニング法の開発を目指すと共に、治療時期や治療薬の選択を可能にする計画である。今年度、我々はヒト角膜上皮の遺伝子発現プロファイルのデータをもとに角膜特異的なマイクロアレイの作成に必要な遺伝子を絞り込み、配列の検定を行った。発現頻度の高いものから順に既知遺伝子、未知遺伝子を問わず角膜上皮で優位に発現しかつ特異性の高い遺伝子を約100個選択し、既知遺伝子ではデータベース検索から特異性の高い配列を、未知遺伝子では比較的特異性が高いと言われている3'UTR領域の配列を、各々200bp以上を確保した。角膜上皮は組織が小さく得られるRNA量は非常に少ない。角膜上皮から抽出したtotal RNAの量的、質的検定を市販のマイクロアレイで検討した。角膜移植時にホスト角膜上皮を剥離しtotal RNAを抽出した15検体について調べたところ、1検体から抽出されるtotal RNAは最大2マイクログラムで、質的にはマイクロアレイに充分使用しうるものであることが明らかになった。

I 々 は corneal に 発 now し て い る posthumous son 伝 の molecules (と quantity) の detailed な デ ー タ を に done alone し accumulation し て き た. This study に お い て は, こ の デ ー タ を も と に cornea specific な マ イ ク ロ ア レ イ を し, has drifted back towards &yen; consummate the cornea と normal cone に お け る posthumous son 伝 の 発 now quantity is mass line analytical を う の. Final に は ア ト ピ ー element for と の masato even を め, has drifted back towards &yen; cause of corneal の survived 伝 cone, modify but 伝 を Ming ら か に し, early 発 see の た め の ス ク リ ー ニ ン グ method の open 発 を refers す と altogether に や treatment, treatment period 薬 の sentaku を may に す る project で あ る. This year, I 々 は ヒ ト corneal epithelium の posthumous son 伝 発 now プ ロ フ ァ イ ル の デ ー タ を も と に cornea specific な マ イ ク ロ ア レ イ の に necessary to consummate な heritage 伝 son を ground り 込 み, column の 検 fixed line を っ た. 発 now high frequency の い も の か ら shun に know both heritage 伝 son, unknown but 伝 を ask わ ず corneal epithelium で primacy に 発 now し か つ high specificity の い posthumous son 伝 を about 100 sentaku し, already know but 伝 で は デ ー タ ベ ー ス 検 cable か ら high specificity の い match column を, unknown but 伝 で は compared with a high specificity が い と said わ れ て い る 3 'UTR field の column Youdaoplaceholder0 each 々 more than 200bp を ensure that た た. The corneal epithelial <s:1> tissue が is small さく, and the amount of られるRNA に is very に and な な. The corneal epithelium 検 ら extracts the amount of <s:1> たtotal RNA <s:1> and the quality of 検 determine を for sale in the market, ロアレ ロアレ で検 で検 for で検. Corneal transplantation に ホ ス ト corneal epithelium を stripping し を total RNA extraction し た 15 検 body に つ い て adjustable べ た と こ ろ, 1 検 か ら spare さ れ る total RNA は maximum 2 マ イ ク ロ グ ラ ム で, qualitative に は マ イ ク ロ ア レ イ に fully use し う る も の で あ る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Kinoshita S: "DNA chip analysis of the gene expression of human T cells in Stevens-Johnson syndrome"Investigative Ophthalmology & Visual Science (Suppl). 41. S957 (2000)

Kinoshita S：“史蒂文斯-约翰逊综合征中人类 T 细胞基因表达的 DNA 芯片分析”调查眼科

Nakamura T: "Gelatino-lattice corneal dystrophy : clinical features and mutational analysis"American Journal of Ophthalmology. 129. 665-666 (2000)

Nakamura T：“明胶格状角膜营养不良：临床特征和突变分析”美国眼科杂志。

Koizumi N: "Cultivation of corneal epithelial cells on intact and denuded human amniotic membrane."Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41. 2506-2513 (2000)

Koizumi N：“在完整和裸露的人羊膜上培养角膜上皮细胞。”调查眼科

Tachibana M: "Expression of estrogen receptor alpha and beta in the mouse cornea"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41. 668-670 (2000)

Tachibana M：“小鼠角膜中雌激素受体α和β的表达”眼科研究

Adachi W: "Human uroplakin Ib in ocular surface epithelium"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41. 2900-2905 (2000)

Adachi W：“眼表上皮细胞中的人类尿斑蛋白 Ib”眼科研究