臨床応用をめざした培養口腔上皮ステムセルを用いた粘膜シートの開発

利用培养的口腔上皮干细胞开发粘膜片用于临床应用

• 批准号: 14657450
• 负责人: 木下 茂
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657450/
• 关键词: 口腔粘膜上皮; 角膜上皮; 結膜上皮; 羊膜; 眼表面疾患; 眼表面再建

Stevens-Johnson症候群や熱化学外傷などの難治性眼表面疾患に対する自己(オート)の粘膜上皮を用いた眼表面再建術の開発を目的として、さまざまな細胞ソースの中から、その細胞生物学的特徴および組織採取による利便性、安全性、倫理面等を考慮して、口腔粘膜上皮に注目し、羊膜上を基質に用いたヒト培養口腔粘膜上皮移植術を確立した。さまざまな基礎的な動物実験による知見を集積し、in vitroからIn vivoへの移植に耐えうるヒトでの培養口腔粘膜上皮シート作成の条件について詳細に検討した。なぜなら、生体に近い上皮細胞層を作成するためには、瞬目による機械的摩擦に耐えうるだけの基質との接着性をもち、また基底細胞層で一定の増殖能を保った重層化した培養細胞層を作る必要があるからである。検討の結果、基質としての羊膜はEDTAにより羊膜上皮細胞を除去して用いること、培養にはマイトマイシンC処理した3T3細胞との共培養を行うことによって安定化すること、培養期問後半に培養上皮シートを空気に暴露する(air-lifting)ことによって、表層細胞のバリアー機能を持たせることが、我々の施設で作成する条件においては必須であることがわかった。以上のような一連の基礎的実験データをふまえ、我々の施設では、大学倫理委員会および研究審査委員会のガイドラインに従って十分なインフォームドコンセントを行った上で、本学歯科および産婦人科の協力を得て、難治性眼表面疾患に対する自家培養口腔粘膜上皮移植術を開始した。現在、移植後1年以上の症例を注意深く観察しているが、上皮修復といった観点からは、本手術法は成功をおさめている。同時に、長期にわたる培養上皮の寿命や血管新生等の問題も含め、現在本術式の適応が明らかになりつつある。本手術法は難治性眼表面疾患に対する自己粘膜を用いたオート移植の可能性に一石を投じたことは間違いないと確信する。

The objective of developing ocular surface reconstruction for Stevens-Johnson syndrome and refractory ocular surface disorders caused by thermochemical trauma is to focus on the oral mucosal epithelium, the characteristics of cell biology, and the convenience, safety, and ethical aspects of tissue adoption. Establishment of oral mucosa transplantation with amniotic medium The conditions for the preparation of cultured oral mucosa epithelium were discussed in detail. In addition, it is necessary to maintain the growth ability of cultured cells in the basal layer of epidermis. The results of the study, matrix and amniotic membrane EDTA treatment, amniotic epithelial cells removal, culture, C treatment, 3T3 cells co-culture, stabilization, culture, and post-culture epithelial cells exposure (air-lifting), surface cells, functions, conditions, requirements. The foundation of the above-mentioned research and development, the implementation of our program, the implementation of university ethics committees and research review committees, the cooperation of our dental and obstetric departments, and the initiation of self-cultured oral mucosal epithelial transplantation for refractory ocular surface diseases. Now, more than 1 year after transplantation, the case should be carefully observed, epithelial repair should be carried out, and the surgical method should be carried out successfully. At the same time, long-term culture of epithelial life and angiogenesis and other issues, now the operation is suitable for the light and light. This surgery is very effective in treating refractory ocular surface diseases.

项目成果

Nakamura T: "The Successful culture and autologous transplantation of rabbit oral mucosal epithelial cells on amniotic membrane."Invest Ophthalmol Vis Sci.. 44. 106-116 (2003)

Nakamura T：“兔口腔粘膜上皮细胞在羊膜上的成功培养和自体移植。”Invest Ophasemol Vis Sci.. 44. 106-116 (2003)

Nakamura T: "The successful culture and autologous transplantation of rabbit oral epithelial cells using amniotic membrane as a carrier"Experimental Eye Research. 72. S125 (2002)

Nakamura T：“以羊膜为载体成功培养和自体移植兔口腔上皮细胞”实验眼科研究。

Kinoshita S: "Development of cultivated mucosal epithelial sheet transplantation for ocular surface reconstruction."Artif Organs.. 28(1). 22-27 (2004)

Kinoshita S：“用于眼表重建的培养粘膜上皮片移植的发展。”Artif Organs.. 28(1)。

Nakamura T: "The Successful Culture and Autologous Transplantation of Rabbit Oral Mucosal Epithelial Cells on Amniotic Membrane"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44. 106-116 (2003)

Nakamura T：“羊膜上兔口腔粘膜上皮细胞的成功培养和自体移植”眼科研究

Nakamura T: "Ocular surface reconstruction using cultivated mucosal epithelial stem cells."Cornea. 22. S75-S80 (2003)

Nakamura T：“使用培养的粘膜上皮干细胞重建眼表。”角膜。