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コムギ動原体領域の機能解析

小麦着丝粒区域的功能分析

基本信息

批准号：
13760004
负责人：
鈴木剛
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka Kyoiku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

FISH法を用いて単離したコムギ動原体領域にはレトロトランスポゾンに関連した反復配列が存在している。本研究では、植物染色体における動原体の機能を明らかにするために、コムギ動原体領域を含むバイナリーコスミドクローンCENT14をイネ及びタバコに導入することを試みた。イネは昨年度作出した形質転換体について、PCRなどにより導入遺伝子の有無を調べたが、結果はネガティブであり、全てエスケープであることが分かった。従って、選抜用抗生物質のジェネティシンの濃度を再度検討しながら今春形質転換を行った。その結果、選抜培地上で増殖するカルスを1クローンのみ得た。この1クローンは、再分化培地に移したが、増殖するのみで再分化しなかった。このクローンのカルスから簡易的にDNAを単離しPCRを行ったところ、選抜マーカーのNPTII遺伝子やコムギ動原体関連配列の存在が確認された。つまり、このクローンには確かにCENT14が導入されているが、細胞分裂に少し異常があったために再分化できないものと考えられた。現在このクローンの染色体像をとらえるために、カルスを前処理して押しつぶし標本の作製を行っているところである。タバコについては、導入時にアセトシリンゴンを加えてみることを試みたが、濃度が高くなりすぎると形質転換効率が落ちたことから、高濃度のアセトシリンゴン添加は悪影響であると思われた。様々な条件で作出した形質転換タバコについて、サザンブロット分析を行い、推定コピー数が多いものをピックアップし、成葉から核溶液を調整した。それらを材料にDNAファイバーFISHを2色で行うことを試みた。コンストラクト全体とベクター部分の色分けすることにより、2つのコンストラクトが同じ方向にタンデムに並んでいるシグナルが確認できた。

FISH法采用同源异型杂交法，将原核细胞区域内的DNA序列进行杂交，得到一个完整的DNA序列，并将该序列中存在的DNA序列进行杂交。本研究的染料，植物体染料木素原材料能明显提高染料木素的纯度，染料木素原材料区域含染料木素的量为14当量，以及染料木素的掺入量为10当量。恐龙年度制作的恐龙形状标本，PCR扩增申请纳入种子库有无异常，果实鉴定申请有无异常，全形态标本有无异常，全形态标本有无异常。従って、選抜用抗生物質のジェネティシンの濃度を再度検討しながら今春形質転換を行った。その結果、選抜培地上で増殖するカルスを1クローンのみ得た。この1クローンは、再分化培地に移したが、増殖するのみで再分化しなかった。但是，这种方法并不简单，因为DNA测序容易的话，DNA测序PCR就可以进行扩增，而NPTII DNA测序则可以进行核酸原位杂交，核酸原位杂交则可以进行核酸原位杂交。采购申请，采购采购申请，采购14美分的进口合格证，细胞裂解减少，正常细胞裂解减少，再分化，细胞裂解减少，试验结束。現在このクローンの染色体像をとらえるために、カルスを前処理して押しつぶし標本の作製を行っているところである。タバコについては、導入時にアセトシリンゴンを加えてみることを試みたが、濃度が高くなりすぎると形質転換効率が落ちたことから、高濃度のアセトシリンゴン添加は悪影響であると思われた。様々な条件で作出した形質転換タバコについて、サザンブロット分析を行い、推定コピー数が多いものをピックアップし、成葉から核溶液を調整した。荧光染料材料的DNA荧光染料FISH 2色荧光染料荧光染料。コンストラクト全体とベクター部分の色分けすることにより、2つのコンストラクトが同じ方向にタンデムに並んでいるシグナルが確認できた。