動脈硬化発症に関与する脂質過酸化物の同定

鉴定参与动脉硬化发展的脂质过氧化物

• 批准号: 13770222
• 负责人: 浅野 水辺
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770222/
• 关键词: オキシステロール; 過酸化脂質; 動脈硬化; コレステロール過酸化物; HPLC; 化学発光検出法

剖検時にヒト腹部大動脈より、正常または粥状硬化病変を有する血管壁を採取した。これよりFolch法により粗脂質を抽出し、さらに固相抽出法を用いてコレステロール画分を精製分取した。このコレステロール画分を化学発光-高速液体クロマトグラフ(CL-HPLC)法にて分析したところ、粥状硬化病変(n=15)からはコレステロール過酸化物である7-hydroperoxycholesterolの2種の異性体(7α-,7β-hydroperoxycholesterol)が検出された。5α-hydroperoxycholesterolは検出されなかった。内部標準法にて定量したところ、7α-,7β-hydroperoxycholesterolはそれぞれ2.3±1.0 nmol/g、4.9±2.2nmol/gであった。一方、正常血管壁(n=15)からはいずれのコレステロール過酸化物も検出されなかった。紫外部吸収-高速液体クロマトグラフ(UV-HPLC)法にてコレステロール酸化物である7-ketocholesterol,7α-,7β-hydroxycholesterolの定量分析を試みた。カラムはODS-2(150×4.0mm)を、移動相にはアセトニトリル/メタノール/水(46:45:9)を流速0.7ml/minで用いた。この条件で3種のコレステロール酸化物は分離可能であり、β-sitosterolを用いた内部標準法にてnmolレベルで定量可能であった。吸収波長210nmでは3種のコレステロール酸化物が同時に検出されたが、245nmでは7-ketocholesterolのみが特異的に検出された。吸収波長245nmの方が7-ketocholesterolに関して約2.5倍感度が良かった。よって、7-ketocholesterolは吸収波長245nmで測定した。分析した粥状硬化病変(n=15)の7-ketocholesterolは22.0±9.0nmol/gであった。正常血管壁からは7-ketocholesterolを検出しなかった。粥状硬化病変、正常血管壁のいずれからも7α-,7β-hydroxycholesterolは検出されなかった。

The blood vessel wall of the abdominal aorta was taken from the abdomen when the disease occurred. The following methods were used to extract crude lipids and refine them by solid phase extraction. Two heteromorphic forms (7α-, 7 β-hydroperoxycholesterol) of 7-hydroperoxycholesterol were identified by CL-HPLC (high speed liquid chromatography). 5α-hydroperoxycholesterol The internal standard method was used to determine the concentrations of 7α-, 7 β-hydroperoxycholesteryl and 7α-, 7 β-hydroperoxycholesteryl. One side, normal vascular wall (n=15), and the other side, normal vascular wall (n =15). Determination of 7-ketocholesterol,7α-, 7 β-hydroxycholesterol by UV-HPLC The flow rate of ODS-2(150×4.0mm), mobile phase and water (46:45:9) is 0.7ml/min. These conditions allow for the separation of 3 kinds of β-sitosterol and its quantification by internal standard methods. Absorption wavelength: 210nm, 3-ketocholesterin, 7-ketocholesterin, 245nm The absorption wavelength of 245nm is about 2.5 nm, and the 7-ketocholesterol concentration is about 2.5 nm. 7-ketocholesterol was detected at an absorption wavelength of 245nm. Analysis of 7-ketocholesterol (n=15) was 22.0±9.0nmol/g. 7-ketocholesterin is present in normal vascular walls. 7α-, 7 β-hydroxycholesterin was found in the walls of atherosclerosis and normal vessels.