DNAマイクロアレイ法を用いたFKHRL1のターゲット遺伝子の同定と機能解析

DNA微阵列法鉴定FKHRL1靶基因并进行功能分析

• 批准号: 13770585
• 负责人: 内田 美栄
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770585/
• 关键词: FKHRL1; エリスロポエチン; 転写因子; サイトカイン; エリストポエチン

FKHRL1はFOXファミリーに属する転写因子である。FKHRL1は非リン酸化状態で核内に存在し転写因子として働くが、リン酸化を受けると核外に移行し転写活性を失う。我々は、赤芽球系細胞ではエリスロポエチン(EPO)刺激によって活性化されたAktによってFKHRL1が面接リン酸化され、核外に移行し転写活性化能を失うことを報告した。そこでFKHRL1の転写因子としての機能を解析するために、Aktによってリン酸化される3つのアミノ酸残基をアラニンに置換した恒常活性型変異体(FKHRL1-TM)を得た。この遺伝子をEPO依存性細胞株UT-7/EPOにタモキシフェン誘導系を用いて導入し、転写活性を持つFKHRL1の発現を誘導操作しうる細胞株を確立した。タモキシフェン添加により導入したFKHRL1が核内に集積し、転写活性が約30倍に増加することを確認した。この遺伝子導入細胞株からタモキシフェン添加前、12時間後、24時間後にtotal RNAを抽出しcDNAマイクロアレイ法を用いて発現に差のある遺伝子の検討を行った。その結果、恒常活性型FKHRL1の誘導により、細胞周期、アポトーシス、腫瘍化に関係のある多数の遺伝子の発現増加が見られた。中でも我々はCyclinG2、PA26、C/EBPδの発現が増加することに注目した。いずれも、詳細な機能は明らかにされていないが、細胞周期停止に関与すると報告されている。これらの遺伝子の発現増加は、Real time PCRを用いて確認中である。以上の結果よりこれらの遺伝子がFKHRL1のターゲットである可能性が示唆された。今後、これらの遺伝子の赤芽球系における機能を解析し、FKHRL1によって誘導されるG0/G1 arrestの責任遺伝子であるか否かを明らかにする。

FKHRL1 ファ FOXファ リ に に に belongs to する転 write factor である. FKHRL1 は non リ ン acidification に exist in a state で nuclear し planning write factor と し て 働 く が, リ ン acidification を by け る と nucleus に transitional し を lost う planning write activity. I 々 は, red gemmule cells で は エ リ ス ロ ポ エ チ ン (EPO) stimulation に よ っ て activeness さ れ た Akt に よ っ て FKHRL1 が surface after リ ン acidification さ れ, nucleus に transitional し planning can write activeness を lost う こ と を report し た. そ こ で FKHRL1 の planning write factor と し て の function analytical す を る た め に, Akt に よ っ て リ ン acidification さ れ る 3 つ の ア ミ ノ acid residues を ア ラ ニ ン に replacement し た constant activity type 1 - (FKHRL1 - TM) を た. こ の posthumous son 伝 を EPO dependency cell lines UT - 7 / EPO に タ モ キ シ フ ェ ン induction system を with い て import し, planning to write activity を つ FKHRL1 の 発 now を induced operation し う る cell lines を establish し た. タ モ キ シ フ ェ ン add に よ り import し た FKHRL1 が に within set product し, planning to write activity が に raised about 30 times add す る こ と を confirm し た. こ の posthumous son 伝 import cell lines か ら タ モ キ シ フ ェ ン add に before, 12, 24 time after time after total RNA を spare し cDNA マ イ ク ロ ア レ を イ method with い て 発 now poor に の あ る heritage 伝 son の 検 line for を っ た. そ の results, constant activity type FKHRL1 の induced に よ り, cell cycle, ア ポ ト ー シ ス, swollen sores change に masato is の あ る most の heritage 伝 son の 発 now rights が see ら れ た. In our 々 々 cycling 2, PA26, and C/EBPδ <s:1>, there is an increase in が and する た とに, which attracts more attention to た た. い ず れ も, detailed な functional は Ming ら か に さ れ て い な い が, cell cycle stop に masato and す る と report さ れ て い る. <s:1> れら cultural heritage 伝 sub-伝 occurrence increase, Real time PCRを use れら て confirmation in である. The above <s:1> results よ, れら, れら, 伝, が, FKHRL1, <s:1>, タ, ゲットである, が, が indicate された. Son in the future, こ れ ら の heritage 伝 の red gemmule department に お け る function analytical し を, FKHRL1 に よ っ て induced さ れ る G0 / G1 arrest の responsibility heritage 伝 son で あ る か no か を Ming ら か に す る.

项目成果

Uchida, M.: "Erythropoietin regulates the cell cycle of erythroid cells by shifting the subcellular localization of FKHRL1 via phosphorylation"Blood. 98・11. 757a (2001)

Uchida, M.：“促红细胞生成素通过磷酸化改变 FKHRL1 的亚细胞定位来调节红系细胞的细胞周期”Blood 98・11 (2001)。

Komatsu, N: "A member of Forkhead transcription factor FKHRL1 is a downstream effector of ST1571 induced cell cycle arrest in BCR-ABL expressing cells"J Biol Chem. 278. 6411-6419 (2003)

Komatsu, N：“Forkhead 转录因子 FKHRL1 的成员是 BCR-ABL 表达细胞中 ST1571 诱导的细胞周期停滞的下游效应子”J Biol Chem。

Kirito, K: "Identification of the human erythropoietin receptor region required for Stat1 and Stat3 activation"Blood. 99. 102-110 (2002)

Kirito, K：“Stat1 和 Stat3 激活所需的人类促红细胞生成素受体区域的鉴定”血液。

Mori, M.: "CAM-cytarabine, aclarubicin plus macrophage colony-stimulating factor in the treatment of acute myelogenous leukemia with trilineage dysplasia : usefulness of in vitro apoptosis in leukemic cells"Leuk Lymphoma.. 42・3. 387-391 (2001)

Mori, M.：“CAM-阿糖胞苷、阿克拉霉素加巨噬细胞集落刺激因子治疗伴有三系发育不良的急性髓性白血病：白血病细胞体外凋亡的作用”Leuk Lymphoma.. 42・391（2001） ）

Tanaka, M: "Forkhead family transcription factor FKHRL1 is expressed in human megakaryocytes and regulates cell cycling as a downstream molecule of TPO signaling"J Biol Chem. 276. 15082-15089 (2001)

Tanaka, M：“Forkhead 家族转录因子 FKHRL1 在人类巨核细胞中表达，并作为 TPO 信号传导的下游分子调节细胞周期”J Biol Chem。