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転写因子FKHRL1の正常造血における機能解析

转录因子FKHRL1在正常造血中的功能分析

基本信息

批准号：
15790499
负责人：
内田美栄
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、エリスロポエチン依存性細胞株、UT-7/EPOにForkhead familyの一員である転写因子、FKHRL1の恒常活性型(FKHRL1-TM)及び優位抑制型(FKHRL1-DN)を遺伝子導入し、遺伝子導入株を樹立した。それらと親株であるUT-7/EPOを比較する手法を用いて、FKHRL1-TM導入株では、EPO存在下でも、細胞周期が停止することを見い出した。また、UT-7/EPOは、EPOを除去後約24時間で細胞周期が停止し、その後アポトーシスを起こすのに対して、FKHRL1-DN導入株では、細胞周期は停止せずにより早期にアポトーシスを起こすことを確認した。UT-7/EPOにおいて、内因性のFKHRL1は、EPOを除去すると核内へ移行し活性化されることから、転写因子FKHRL1は、細胞の生存にとって不利な環境下での細胞の生存に必要な因子であることが示唆された。換言すると、細胞がアポトーシスを起こすのを阻止する方向に働く遺伝子ではないかと考えた。FKHRL1-DNの結果をさらに確かめる目的で、FKHRL1のsiRNAを用いて、同様に細胞周期、アポトーシスの解析を行ったところ、同様の結果が得られた。これらの細胞株で得られた結果を動物モデルで確認する目的で、FKHRL1-TM及びFKHRL1-DNをGATA-1 promoterの下流に繋げた遺伝子を用いて、トランスジェニックマウスを作成した。外観は野生型と変わりなく、また、赤芽球、巨核球系に何らかの異常を持つことを期待したが、末梢血所見、骨髄所見、脾臓の所見も特に差異を認めなかった。

We tested the cell lines of dependence, UT-7/EPO Forkhead family, FKHRL1-TM and FKHRL1-DN genes of FKHRL1, and introduced the spores into the plant. In the presence of EPO, the cell cycle was stopped, and the cell cycle was stopped in the presence of FKHRL1-TM, FKHRL1-TM, EPO and cell cycle. About 24 hours after the cell cycle stops, and the cell cycle stops. In the early stage, the cell cycle stops, and the cell cycle stops. In the early stage, the cell cycle stops. UT-7/EPO, endogenous FKHRL1, EPO removes migration activation in the nucleus, writing factors FKHRL1, cellular survival in adverse environments, essential factors for cellular survival and instigating factors. Let's talk about it, let's go, let's go. FKHRL1-DN results verify that the target is correct, that FKHRL1 siRNA is used, that the cell cycle is the same, that the data are analyzed, and that the results of the same test are successful. The results showed that the animals confirmed the purpose of the cell line, the FKHRL1-TM and the FKHRL1-DN GATA-1 promoter were used to make the product. The wild type clam, the red bud ball, the megakaryon ball, the red bud ball, the megakaryon ball, the wild type, the wild type, the red bud ball, the red bud ball, the megakaryon ball, the peripheral blood, the bone, the spleen, the spleen.