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モノクローナル抗体や一本鎖人工抗体を用いた遺伝子導入法による癌の遺伝子治療

使用单克隆抗体和单链人工抗体的基因转移方法进行癌症基因治疗

基本信息

批准号：
07274261
负责人：
清水信義
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

癌の遺伝子治療のためには、生体内で様々な存在様式を示す癌をターゲッティングし効率的に外来遺伝子を導入できる手段を開発しなければならない。本研究はこれを実現するため、2つの目標を追求した。第1は独自に開発し培養細胞レベルでターゲッティングに成功した新しい遺伝子運搬体「抗体/DNA複合体」イムノジーンを用い、個体レベルでの扁平上皮癌の遺伝子治療法を確立することである。研究過程で抗ヒトEGFレセプター抗体B4G7のFab断片を使用する(Fabイムノポーター)ことにより抗体全体を利用する50倍以上高い遺伝子導入効率が得られることが判明した。腫瘍移植ヌードマウスにおいて、レポーター遺伝子を用いたこのFabイムノジーンにより、腫瘍特異的な遺伝子導入が確認された。またFabイムノポーターでHSV-TK遺伝子を導入する(TK-Fabイムノジーン)とガンシクロビル(GCV)に対するLD50が非導入細胞の1/100-1/1000となり、著しい薬剤高感受性を示した。さらにTK-FabイムノジーンとGCVの併用により、腫瘍移植ヌードマウスにおいて顕著な抗腫瘍効果が認められた。第2の目標は、抗体/DNA複合体を効率よく作製しかつ臨床での有効性を高めるため複合体の抗体部分を人工一本鎖抗体と置き換えることである。そのため、ハイブリドーマB4G7のmRNAからRT-PCR法を用い一本鎖抗体遺伝子を作製し全塩基配列を決定した。その産物はB4G7抗体と競合した。メタノール資化性酵母Pichia pastorisを用いた発現系では、大腸菌の20-100倍に相当する培地1リットル当たり20mg-100mgの一本鎖抗体が得られた。本研究で、イムノジーン法は生体内の特定細胞へのターゲッティングも可能な遺伝子導入法であることが示され、人工抗体の利用も合わせ将来の遺伝子治療に有効なの技術として期待できる。

Cancer gene therapy is based on the expression of the gene in vivo, and the development of a new method for introducing foreign genes into cancer cells. This study aims to achieve the goals of the two. The first step is to develop a new vector vector "antibody/DNA complex" in cultured cells and establish a vector therapy for squamous epithelial carcinoma in individuals. During the study, it was found that the Fab fragment of anti-EGF antibody B4G7 was more than 50 times higher than that of the whole antibody. The introduction of the Fab Gene and the selection specific gene was confirmed. HSV-TK gene introduction (TK-Fab gene introduction) and GCV (GCV) are 1/100-1/1000 of LD50 in non-introduced cells, showing high susceptibility to HSV-TK gene introduction. The combination of TK-Fab and GCV can be used to treat cancer. The second objective is to control the efficiency of antibody/DNA complexes in clinical settings. B4G7 mRNA expression was determined by RT-PCR. The product is B4G7. The results showed that 20-100 times of E. coli was produced by using Pichia pastoris, and 20 mg-100 mg of an antibody was produced. In this study, the gene therapy method for specific cells in vivo may be used for gene introduction, and the use of artificial antibodies may be used for gene therapy in the future.