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免疫グロブリン遺伝子導入マウスを利用したヒト型高親和性抗体の作製と抗体遺伝子解析

利用免疫球蛋白转基因小鼠制备高亲和力人抗体并进行抗体基因分析

基本信息

批准号：
10877080
负责人：
赤水尚史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、ヒト免疫グロブリン遺伝子導入マウスを用いて、ヒト型抗TSH受容体抗体の作製と同抗体遺伝子解析を試みている。本年度は、抗原であるTSH受容体の精製と解析をさらにすすめた。TSH受容体蛋白として、バキュロウイルス系のシステムによつて大量発現精製し、これを精製している。すなわち、我々はこれまでに以下の方法によりC末端にHis tagを融合させた可溶型TSHRの作成を行った。この方法によつて、我々は初めて細胞の培養上に可溶性TSHRを分泌させることに成功した。また、ヒトTSHRあるいはバキュロウイルスgp67蛋白質のシグナル配列を付加したTSHRの細胞外ドメインをコードするsTSHR-Wild(aa1-410)、sTSHR-gp(aa21-410)を作製し、その発現、性状を比較検討した。その結果、sTSHR-Wild及びsTSHR-gpは細胞上清画分から約58KDa、細胞抽出画分から約62、49KDaの蛋白質として検出された。両面分の可溶型TSHRのサイズの違いを検討するため、グリコシダーゼを用いて糖鎖の同定を行ったところ、細胞抽出画分の可溶型TSHRはハイマンノース型糖鎖を、細胞上清画分の可溶型TSHRは欠失型ハイマンノース型糖鎖を持っていた。さらにバセドウ病患者血清中の抗TSHR抗体との結合性を検討したところ、両面分から得られたsTSHR-Wild、sTSHR-gpどちらも抗TSHR抗体と結合したが、sTSHR-gpの方が抗体結合が高かった。また、TSHに対する結合性はsTSHR-gpの細胞上清画分にのみ確認された。これらのことから可溶性TSHRの細胞上清の分泌性には付加される糖鎖が重要であるが、抗体との結合には影響を与えないものと思われた。しかしシグナル配列の違いにより抗体結合性に差が生じたことから、バキュロウイルスのシグナル配列を付加した方がよりnativなTSHRを作製できるものと考えられた。ヒト免疫グロブリン遺伝子導入ゼノマウス(XenoMouse II)供給を日本たばこ産業株式会社医薬研究所・久保田から供給してもらうめどがついた。

I introduced the 々は, ヒトimmune peptide into the マウスを and used the いて, ヒト type anti-TSH receptor antibody to produce and analyze the isoantibodies みている. This year, the antigen and TSH receptor were refined and analyzed. TSH receptor protein として, バキュロウイルス线のシステムによつて大発成し, これを综合している.すなわち、I 々はこれまでにThe following method is によりC-terminal にHis tagをfusion させたsoluble type TSHRの成を行った. In this method, I have succeeded in secreting soluble TSHR in cultured cells.また、ヒトTSHRあるいはバキュロウイルスgp67proteinのExtracellular TSHR extracellular sTSHR-Wild (aa1-410), sTSHR-gp (aa21-410) are produced and produced, and their characteristics are compared. As a result, the cell supernatant of sTSHR-Wild and sTSHR-gp was divided into approximately 58KDa, and the cell extract was divided into approximately 62 and 49KDa proteins, respectively.両面分のsoluble type TSHRのサイズのviolationいを検恙るため、グリコシダーゼを用いてsugar lockの同定を行ったところ、cell extraction and drawing The soluble type of TSHR is a type of sugar lock, and the cell supernatant is divided into soluble type of TSHR and a type of sugar lock. Anti-TSHR antibodies and binding properties of TSHR-W in the serum of patients with TB disease ild, sTSHR-gp どちらもanti-TSHR antibody binding したが, sTSHR-gp の方がantibody binding が高った. The cell supernatant of TSHR-gp was drawn and analyzed to confirm the binding properties of TSH and TSHR-gp. Soluble TSHR, cell supernatant, secreted sugar, added sugar The lock is important, the antibody is combined with the effect, and the antibody is combined with the effect.しかしシグナルのviolation いによりAntibody binding property に Poor が生じたことから、バキュロウイルスのThe シグナルmatching をpay加した方がよりnativなTSHRをproduced できるものと卡えられた. XenoMouse II)Supply to Nippon Medical Research Institute and Kubota Medical Research Institute.