免疫グロブリン遺伝子導入マウスを利用したヒト型高親和性抗体の作製と抗体遺伝子解析
利用免疫球蛋白转基因小鼠制备高亲和力人抗体并进行抗体基因分析
基本信息
- 批准号:10877080
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 1999
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
我々は、ヒト免疫グロブリン遺伝子導入マウスを用いて、ヒト型抗TSH受容体抗体の作製と同抗体遺伝子解析を試みている。本年度は、抗原であるTSH受容体の精製と解析をさらにすすめた。TSH受容体蛋白として、バキュロウイルス系のシステムによつて大量発現精製し、これを精製している。すなわち、我々はこれまでに以下の方法によりC末端にHis tagを融合させた可溶型TSHRの作成を行った。この方法によつて、我々は初めて細胞の培養上に可溶性TSHRを分泌させることに成功した。また、ヒトTSHRあるいはバキュロウイルスgp67蛋白質のシグナル配列を付加したTSHRの細胞外ドメインをコードするsTSHR-Wild(aa1-410)、sTSHR-gp(aa21-410)を作製し、その発現、性状を比較検討した。その結果、sTSHR-Wild及びsTSHR-gpは細胞上清画分から約58KDa、細胞抽出画分から約62、49KDaの蛋白質として検出された。両面分の可溶型TSHRのサイズの違いを検討するため、グリコシダーゼを用いて糖鎖の同定を行ったところ、細胞抽出画分の可溶型TSHRはハイマンノース型糖鎖を、細胞上清画分の可溶型TSHRは欠失型ハイマンノース型糖鎖を持っていた。さらにバセドウ病患者血清中の抗TSHR抗体との結合性を検討したところ、両面分から得られたsTSHR-Wild、sTSHR-gpどちらも抗TSHR抗体と結合したが、sTSHR-gpの方が抗体結合が高かった。また、TSHに対する結合性はsTSHR-gpの細胞上清画分にのみ確認された。これらのことから可溶性TSHRの細胞上清の分泌性には付加される糖鎖が重要であるが、抗体との結合には影響を与えないものと思われた。しかしシグナル配列の違いにより抗体結合性に差が生じたことから、バキュロウイルスのシグナル配列を付加した方がよりnativなTSHRを作製できるものと考えられた。ヒト免疫グロブリン遺伝子導入ゼノマウス(XenoMouse II)供給を日本たばこ産業株式会社医薬研究所・久保田から供給してもらうめどがついた。
I 々 は, ヒ ト immune グ ロ ブ リ ン posthumous son 伝 import マ ウ ス を with い て, ヒ ト TSH resistant と の let body antibody from a system with traces of antibody 伝 son parsing を try み て い る. This year, をさらにすすめた, antigen であるTSH receptor <s:1> refinement と analysis をさらにすすめた. TSH by the capacity of body protein と し て, バ キ ュ ロ ウ イ ル ス is の シ ス テ ム に よ つ て 発 refined し now, こ れ を refined し て い る. す な わ ち, I 々 は こ れ ま で に の way below に よ り C terminal に His tag fusion を さ せ た type soluble TSHR の made line を っ た. こ の way に よ つ て, I 々 は early め の て cell culture に soluble TSHR を secretion さ せ る こ と に successful し た. ま た, ヒ ト TSHR あ る い は バ キ ュ ロ ウ イ ル ス gp67 protein の シ グ ナ ル go を plus し た TSHR の extracellular ド メ イ ン を コ ー ド す る sTSHR - Wild (aa1-410), sTSHR - gp を (aa21-410) for し, そ の 発 now beg し, character を comparison 検 た. The results of そ そ showed that the supernatant fractions of sTSHR-Wild and びsTSHR-gp て検 cells were approximately ら 58KDa, and the cell extract fractions were approximately ら ら 62 and 49KDa. <s:1> proteins と て検 て検 were て検. Struck surface points の type soluble TSHR の サ イ ズ の violations い を beg す 検 る た め, グ リ コ シ ダ ー ゼ を with い with fixed line を っ て sugar lock の た と こ ろ, cell type to draw points の soluble TSHR は ハ イ マ ン ノ ー ス sugar lock を, clear picture on cellular type points の soluble TSHR は owe loss type ハ イ マ ン ノ ー ス type sugar lock を hold っ て い た. さ ら に バ セ ド ウ の anti TSHR antibody in sera of と の associativity を beg し 検 た と こ ろ, struck points か ら have ら れ た sTSHR - Wild, sTSHR - gp ど ち ら も TSHR antibody と resistance combined with し た が, sTSHR - gp の が antibody combined with high が か っ た. Youdaoplaceholder0 and TSHに confirmed された of the supernatant of する conjugated <s:1> sTSHR-gp <s:1> cells by に み み. こ れ ら の こ と か ら soluble TSHR の clear の cells secretory に は plus さ れ る sugar lock が important で あ る が, antibody と の combining に は influence を and え な い も の と think わ れ た. し か し シ グ ナ ル go の violations い に よ り antibody combining に born poor が じ た こ と か ら, バ キ ュ ロ ウ イ ル ス の シ グ ナ ル go を plus し た party が よ り nativ な TSHR を cropping で き る も の と exam え ら れ た. ヒ ト immune グ ロ ブ リ ン posthumous son 伝 import ゼ ノ マ ウ ス (XenoMouse II) supply を Japan た ば こ industry co., LTD, institute of medical 薬 long yasuda, か ら supply し て も ら う め ど が つ い た.
项目成果
期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Koshiyama,H., Sellitti,D.F., Doi,S.Q., Akamizu,T., Nakao,K.: "Comment on Thyrotropin Receptor Gene and Mitral Valve Prolapse"J. Clin. Endocrinol. Metab.. 84. 3404-3405 (1999)
Koshiyama,H.,Sellitti,D.F.,Doi,S.Q.,Akamizu,T.,Nakao,K.:“促甲状腺素受体基因与二尖瓣脱垂的评论”J。
- DOI:
- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
赤水尚史: "概論-遺伝子性素因と環境因子。特集「自己免疫性甲状腺疾患」"日本臨床. 57. 1697-1702 (1999)
Naofumi Sekisui:“概述 - 遗传易感性和环境因素。专题:‘自身免疫性甲状腺疾病’”日本临床杂志 57。1697-1702 (1999)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Akamizu T,Moriyama K,Miura M,Saijo M,Matsuda F,Nakao K: "Characterization of recombinant monoclonal anti-thyrotropin receptor antibodies(TSHRAbs)derived trom lymphocytes of natients with Graves disease:Epitope and binding study of two stumulatory TSHRAbs.
Akamizu T、Moriyama K、Miura M、Saijo M、Matsuda F、Nakao K:“来自格雷夫斯病患者淋巴细胞的重组单克隆抗促甲状腺素受体抗体 (TSHRAb) 的表征:两种刺激性 TSHRAb 的表位和结合研究。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Akamizu,M.M.Sale H.Hiratani,M.Miura,M.Saijo,K.Moriyama,J.Y.Noh,S.S.Rich,D.W.Bowden,K.Nakao.: "Association of autoimmune thyroid disease with microsatellite markers for the thyrotropin receptor gene and CTLA-4 in a new set of Japanese population." Proceedi
Akamizu,M.M.Sale H.Hiratani,M.Miura,M.Saijo,K.Moriyama,J.Y.Noh,S.S.Rich,D.W.Bowden,K.Nakao.:“自身免疫性甲状腺疾病与促甲状腺素受体基因和 CTLA 微卫星标记的关联
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Shintani M,Nishimura H,Akamizu T,Yonemitsu S,Masuzaki H,Ogawa Y,et al.: "Thyrotropin decreases leptin production in rat adipocytes"Metablism,. 48. 1570-1574 (1999)
Shintani M、Nishimura H、Akamizu T、Yonemitsu S、Masuzaki H、Okawa Y 等人:“促甲状腺素降低大鼠脂肪细胞中瘦素的产生”Metablism,。
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赤水 尚史
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