DNA損傷チェックポイントコントロールの分子機構

DNA损伤检查点控制的分子机制

• 批准号: 14208084
• 负责人: 杉本 勝則
• 金额: $ 17.31万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14208084/
• 关键词: チェックポイント; 細胞周期; DNA損傷

TEL1を制御する因子を同定するために、Tel1と結合するするタンパク質をTwo-hybrid法で同定することを試みた。スクリーニングの結果、2つのpositive clonesが得られたが、両方のcloneとも、Xrs2のC-末端部位をコードしていた。Xrs2は、Mre11とRad50と結合し、複合体を形成し.DSBの修復に関与している。高等動物では、Xrs2ホモログは、Nbs1と命名され、同様にMre11とRad50と複合体を形成し機能している。DSB部位におけるDNA末端は、5'-3' exonuclease活性により分解され、3' tail endをもつ一本鎖DNA(single-stranded DNA;ssDNA)を生じる。このssDNAの形成に、Mre11-Rad50-Xrs2/Nbs1複合体は必須である。Xrs2のC-末端の機能を解析するため、Xrs2のC-末端の欠失変異、xrs2-11変異、を作成した。このxrs2-11変異は、tel1破壊株と全く同じ表現型をしました。また、免疫沈降法により、Xrs2とTel1は結合することが見いだされたが、その結合は、xrs2-11変異の導入により見られなくなった。ATRおよびMec1は、DNA損傷部位に結合することが、報告されている。次にATMホモログであるTel1が、DSBに結合する検討した。Mre11-Rad50-Xrs2複合体の活性を制御するSAE2遺伝子の変異により、TEL1に依存するチェックポイントの活性は上昇する。まず、sae2破壊株を使ってTel1のDSBに結合を、調べることにした。Tel1は、sae2破壊株でDSBに結合することが示されたが、その結合はSae2が存在する細胞内での結合とかわらなかった。つぎに、Tel1の結合が、Xrs2により制御されているか検討した。Tel1の結合は、xrs2破壊細胞およびxrs2-11変異細胞では認められなかった。Xrs2は、DSB部位でのssDNAの形成に必要である。xrs2-11変異細胞でのssDNAの蓄積を検討したが、野生型細胞のssDNAの形成と差がなかった。以上の結果から、Tel1は、Xrs2のC-末端に依存した機能により、DSBに結合することが明らかになった。

TEL1 is the same factor as the control factor, and Tel1 is the same as the two-hybrid method.スクリーニングのRESULTS, 2つのpositive clonesがGETられたが, 両方のcloneとも, Xrs2のC-terminal part をコードしていた. Xrs2, Mre11 and Rad50 are combined, and the complex is formed. DSB is repaired and repaired. Higher animal では, The DSB site is the end of the DNA, the 5'-3' exonuclease activity is the decomposition of the DNA, and the 3' tail end is the DNA (single-stranded DNA; ssDNA). It is necessary for the formation of ssDNA and the Mre11-Rad50-Xrs2/Nbs1 complex. Analysis of the function of the C-terminal of Xrs2, difference of the C-terminal of Xrs2, difference of xrs2-11, and creation of the difference.このxrs2-11 is different and tel1 is different and has the same phenotype.また, immunosedimentation method により,れたが、その合は、xrs2-11変differentの Importにより见られなくなった. ATR およびMec1は, DNA damage site binding することが, report されている. The ATM service is Tel1, and the DSB connection service is available. The activity of the Mre11-Rad50-Xrs2 complex is controlled by SAE2, and the activity of TEL1 is dependent on it.まず, sae2壊区を使ってTel1のDSBにcombinationを, 动べることにした. Tel1は, sae2 breaks the strain and the DSB binding is done, and the binding is done and Sae2 is present, and the binding is done inside the cell.つぎに、Tel1のcombinationが、Xrs2によりcontrolされているか検した. Tel1 is combined with xrs2, and xrs2 destroys cells. Xrs2 and DSB sites are necessary for the formation of ssDNA. The accumulation of ssDNA in xrs2-11 heterogeneous cells and the formation of ssDNA in wild-type cells are different. The results of the above are as follows: Tel1, Xrs2, C-terminal dependence, function, and DSB binding.