DNAマイクロアレイ法によるアトピー性皮膚炎患者末梢血、皮膚組織の遺伝子解析

DNA微阵列法对特应性皮炎患者外周血和皮肤组织进行遗传分析

• 批准号: 14770433
• 负责人: 東 直行
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770433/
• 关键词: アトピー性皮フ炎; サイトカイン; ケモカイン; DNAマイクロアレイ

アトピー性皮膚炎(AD)患者の末梢血15例(軽症5例,中等度5例,重症5例)、健常人の末梢血7例を採取、アンチセンスRNAを作成、凍結保存している。またAD患者の皮疹部、無疹部皮膚5例、健常人の正常皮膚5例からもアンチセンスRNAを作成、凍結保存している。末梢血、皮膚組織とも目標の症例数に達している。SAGEデータを元に、ターゲットDNAの選別、プライマーの設計を進行させている。ターゲットDNAの数は、8000個を予定し、現在約4500個の作成を終了させているが、今後とも同様にターゲットDNAを作成していく予定である。2000個の任意のターゲットDNAを載せたDNAチップを作成し、健常人サンプル3例、AD患者サンプル9例を用いて、ハイブリダイゼーションとスキャニングの実験を終了して、他のサンプルについても今後逐次遂行予定である。現在得られている末梢血の結果では、症例によりばらつきがあるものの既に発現増強が報告されているTh2サイトカインであるIL-4,5,13やTh2ケモカイン-ケモカイン受容体TARC, MDC, I-309,CCR4,CCR8,さらにCTACK, CCR10など、あるいは好酸球関連蛋白ECP, MBPの発現増加が認められている。同様に既に発現低下が報告されているTh1サイトカインであるIFN-gamma, IL-12の発現低下を認められている。これらの結果は、我々の実験系のプロトコールが正しいことを証明していると言える。逐次他の症例を解析し、さらに臨床症状(重症度、血清IgE値、抗核抗体陽性、陰性)などにより、発現パターンをみていくクラスター解析を施行するには時間を必要とする。しかしながら問題点もまだ多く、コスト削減のためのターゲットDNAの作製に時間がかかるということ、自前で準備したターゲットDNAの安定性、純度を保つことが予想以上に困難であることより、既知ターゲットDNAに関しては、既製品を購入することも視野に入れる必要があるが、資金的な問題がある。

Peripheral blood samples were collected from 15 patients with AD (5 with AD, 5 with moderate AD, 5 with severe AD) and 7 healthy individuals. 5 cases of AD skin with rash and non-rash, 5 cases of normal skin of healthy people The number of peripheral blood, skin tissue and target cases reached the highest level. SAGE DNA Selection and Design 8000 DNA fragments are expected to be produced in the future, while 4500 are expected to be produced in the future. 2000 arbitrary DNA samples were prepared, 3 healthy individuals, 9 AD patients were used, and the results were determined one by one. The results of peripheral blood test showed that the expression of IL-4, 5, 13, Th2 and IL-4 increased in all cases. The expression of TARC, MDC, I-309,CCR4,CCR8, CTACK, CCR10 increased in all cases. In the same way, low levels of IFN-gamma and IL-12 have been reported. The result of this is that we have to prove that we are right. The analysis of each patient's clinical symptoms (severity, serum IgE level, antinuclear antibody positive, negative), and the time required for the analysis of symptoms and symptoms. There are many problems, such as time to reduce DNA production, time to prepare DNA stability and purity, time to prepare DNA, time to buy DNA, and time to buy DNA.