ヒト臍帯血幹細胞を標的にした遺伝子導入および選択的増幅技術の基礎検討

人脐带血干细胞基因转移及选择性扩增技术基础研究

• 批准号: 14770533
• 负责人: 高徳 正昭
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770533/
• 关键词: 遺伝子治療; 慢性肉芽腫症; 臍帯血細胞; 造血幹細胞; 幹細胞増幅

1.iBMTとSAGによる遺伝子治療技術慢性肉芽腫症などの遺伝性疾患に対し造血幹細胞遺伝子治療を臨床応用するためには、放射線照射や抗癌剤を使用する前処置はできる限り省くことが望まれる。そこで、前処置なしで造血幹細胞治療を可能にさせる基盤技術開発をカニクイザルの系で行った。まず、前処置なしで移植細胞を生着させる手段として骨髄内移植法(iBMT)をカニクイザルで検討した。まず、レトロウイルスベクターで標識遺伝子をCD34細胞に遺伝子導入し、この細胞をiBMTで前処置なしで移植した。移植後、コロニー形成細胞(CFU)全体の2-30%が遺伝子導入陽性細胞であったが、末梢血の遺伝子標識細胞は0.1%以下にとどまった。上記の問題を解決するために、移植後の遺伝子導入細胞を生体内で選択的増幅させる目的で選択的増幅遺伝子(SAG)を応用したシステムをiBMT系に組み合わせて検討した。これらの結果より前処置なしに生着した遺伝子導入細胞を、分子スイッチ(EPO)依存性に生体内で増幅させることに成功し、このレベルは臨床応用可能域にまで到達した。また、LAM-PCR法でクローナル解析を行い、増幅された細胞はポリクローン性増幅であることを確認した。2.臍帯血を標的にする検討ヒト臍帯血にSAG遺伝子をレトロウイルスベクターで遺伝子導入し、in vitroで増幅することは既に成功している。そこで現在これが生体内で可能かどうか、X-SCIDマウスに前処置なしでかつiBMT法で移植し、効果を解析しているところである。

1.iBMT 's SAG therapy for chronic granulomatosis, chronic granulomatosis, chronic granulosis, hematopoietic, hematopoietic, cytopathic, hematopoietic, hematopoietic, bone marrow, hematopoietic, cytopathic, hematopoietic, hematopoietic, cytopathic, hematopoietic, bone marrow, hematopoietic, cytopathic, hematopoietic, hematopoietic It is possible that the basic technology should be used in the treatment of hematopoietic cells. The method of intraosseous transplantation (iBMT) was used to treat the disease. Please tell me that you need to know that your child CD34 cell is loaded, and that you need to transplant it before you iBMT it. After transplantation, 2-30% of all the CFU cells were transferred into the sexual cells, and the peripheral blood cells were less than 0.1%. The last problem is to solve the problem. After transplantation, the baby is put into the cell after transplantation. The selected SAG is used to make sure that the iBMT system is used. The results of this study showed that the child was born in the cell, the molecular marker (EPO) was dependent on the body, the cell was successful, and the bed was successful. In this paper, the LAM-PCR method is used to analyze the line, and the frame is used to confirm the data. two。 In terms of blood, SAG, child, in vitro, frame, and so on. It is possible that there is a problem in vivo, that the X-SCID may be affected, that the iBMT method will be used for transplantation, and that the results will be analyzed.

项目成果

Hanazono Y, Nagashi T, Takatoku M, et al.: "In vivo selective expansion of gene-modified hematopoietic cells in a nonhuman primate model"Gene Ther. 9. 1055-1064 (2002)

Hanazono Y、Nagashi T、Takatoku M 等人：“在非人类灵长类动物模型中体内选择性扩增基因修饰造血细胞”Gene Ther。

Itoh A, Okada T, Takatoku M, et al.: "A soluble CAR-SCF fusion protein improves adenoviral vector-mediated gene transfer to c-Kit-positive hematopoietic cells."J Gene Med. 5. 929-940 (2003)

Itoh A、Okada T、Takatoku M 等人：“可溶性 CAR-SCF 融合蛋白改善了腺病毒载体介导的基因向 c-Kit 阳性造血细胞的转移。”J Gene Med。