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発生工学的手法を用いた蛋白尿発症の分子機構解明と新しい腎炎・腎症治療法の開発

利用发育工程方法阐明蛋白尿发病的分子机制并开发新的肾炎/肾病治疗方法

基本信息

批准号：
14770567
负责人：
菅波孝祥
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Research Institute for Production Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770567/
关键词：
糸球体上皮細胞蛋白尿 CTGF Cyr61 プロスタグランジンE EP1 MAPキナーゼ

项目摘要

蛋白尿発症のメカニズムの解明を目的として、糸球体上皮細胞(podocyte)を標的に研究を行い、以下の研究成果を得た。1.培養podocyteの細胞骨格構築、細胞外基質産生に関する細胞内シグナルの解析糖尿病性腎症や慢性腎炎などの蛋白尿出現時には、podocyteの形態変化(足突起の癒合)や細胞外基質の過剰産生(糸球体基底膜の肥厚)が認められる。今回我々は、transforming growth factor-β刺激による細胞外基質産生にconnective tissue growth factor(CTGF)の誘導やMAPキナーゼ系(ERK, p38 MAPK)の活性化が重要であることを培養podocyteを用いて明らかにした。また、酸化ストレスによるactin再構成においても、MAPキナーゼ系(ERK, JNK, P38 MAPK)が関与することを見出した。現在、podocyte傷害ネフローゼ症侯群モデル(アドリアマイシン腎症)において、MAPキナーゼ阻害薬が蛋白尿に及ぼす効果を検討中である。2.podocyte特異的cystein-rich protein 61(Cyr61), CTGF過剰発現マウスの作製と解析podocyteの傷害が蛋白尿の発症や糸球体硬化につながる一方で、糸球体再生モデル(Thy-1腎炎)では、podocyteが糸球体の再生・修復に重要な働きを果たすことが想定されている。そこで、podocyte特異的(subtraction法)で、かつ糸球体再生時に発現亢進(reverse Northern blot法)する遺伝子のスクリーニングを行った。このうち、胎生期の血管形成に不可欠な因子であるCyr61に注目して、メサンギウム細胞の遊走、接着抑制作用をin vitroで明らかにした。さらに、nephrin遺伝子プロモーターの下流にマウスCyr61 cDNAを連結して、podocyte特異的にCyr61を過剰発現するトランスジェニックマウスを作製した。また、同様にCTGF過剰発現マウスも作製した。現在、両者ともfounderが誕生し、lineの確立を行っている。3.糖尿病性腎症モデルにおけるプロスタグランジンE受容体EP1特異的阻害薬(EP1A)の効果の検討1型糖尿病性腎症モデル(ストレプトゾトシン誘発糖尿病)ラットおよびマウスにおいて、EP1Aの投与は、血糖値や血圧に明らかな影響を及ぼすことなく、著明な蛋白尿減少効果を示し、種を超えた有効性が明らかとなった。

The aim of the study was to clarify the development of proteinuria and to target podocyte. The following results were obtained. 1. The cellular structure and extracellular matrix production of cultured podocytes are related to the analysis of intracellular structure in diabetic nephropathy and proteinuria in chronic nephritis. The morphological changes of podocytes (healing of foot processes) and extracellular matrix production (hypertrophy of spherical basement membrane) are recognized. In the present study, the induction of connective tissue growth factor(CTGF) and the activation of MAP kinase (ERK, p38 MAPK) in response to transforming growth factor-β stimulation play an important role in the development of cultured podocytes. The relationship between ERK, JNK, P38 MAPK and actin recombination was revealed. Now, podocyte injury syndrome group (kidney disease) in the middle, MAP in the middle of the prevention of proteinuria and kidney disease in the discussion. 2. Cystein-rich protein 61(Cyr61), CTGF protein expression, its mechanism and analysis of podocyte injury, proteinuria development, glomerulosclerosis, glomerular regeneration (Thy-1 nephritis), podocyte regeneration and repair. Podocyte specific (subtraction method), sphere-specific (reverse Northern blot method), sphere-specific (reverse Northern blot method) Cyr61 plays an important role in angiogenesis during prenatal period. Cyr61 cDNA is linked to the downstream of nephrin gene expression and is produced by podocyte-specific gene expression. The same goes for CTGF. Now, the founder is born, the line is established. 3. Diabetic Nephropathy: A Study of the Effects of EP1 Specific Inhibitor (EP1A) on Diabetic Nephropathy Type 1 (EP1), and the Effects of EP1A on Blood Glucose Levels and Proteinuria Reduction.