Einfluss struktureller Modifikationen von P2X3-Rezeptoren

我们韦尔登人用P2 X3-Rezeptoren strukturelle Änderungen ausführen和Zelllinien（HEK 293- und C6 BU-1）中的Rezeptorkonstrukte（Mutanten，Chimären）进行了试验。HEK 293-Zellen在C6 BU-Zellen内源P2 Y-受体中的酶解和酶解可用于转基因（P2 X3）和内源性转基因（P2 Y1 -2）受体之间的相互作用。Es sollen die folgenden Fragestellungen bearbeitet韦尔登：1. P2 X3-受体的同源和异源脱敏机制：通过蛋白激酶C在N-或C-末端磷酸化，并通过钙/钙调蛋白的结合在韦尔登中产生一个稳定的平衡。Beide Einquirkungen können zu einer verminderten Leitfähigkeit des Rezeptor-Ionenkanal-Komplexes führen. 2. P2 X3受体的配体-结合：这将通过激动剂-和拮抗剂-结合来实现。逆转性（Suramin）和准不逆转性（PPADS）拮抗剂的相互结合是必要的。3.乙醇和三氯乙醇对P2 X3-Rezeptoren的影响：由于三氯乙醇诱导的细胞毒性和Ca 2 +-Rezeptors的渗透性最好，因此这是一个很好的韦尔登选择。4.通过P2 Y受体阻断N-Type Ca ~（2+）-Kanälen的形成：这种碎片的形成是P2 Y受体阻断N-Type Ca ~（2+）-Kanälen的机制。Mögliche Alternativen sind die Vermittlung über ein Escheriches G-Protein，die Phosphorylierung des Kanals durch die Protein kinase C or die Abnahme der Ströme infolge des Anstiegs der intrazellulären freien Ca2+-Konzentration.

Wir werden an humanen rekombinanten P2X3-Rezeptoren strukturelle Änderungen ausführen und die Rezeptorkonstrukte (Mutanten, Chimären) in Zelllinien (HEK 293- und C6BU-1) exprimieren. HEK 293-Zellen enthalten im Gegensatz zu C6BU-Zellen endogene P2Y-Rezeptoren und ermöglichen deshalb Untersuchungen zur Interaktion zwischen dem transfizierten (P2X3) und dem endogenen vorhandenen (P2Y1-2) Rezeptor. Es sollen die folgenden Fragestellungen bearbeitet werden: 1. Mechanismen der homologen und heterologen Desensibilisierung des P2X3-Rezeptors: Es soll zwischen der Phosphorylierung am N- oder C-Terminus durch Proteinkinase C und einer gestörten Verankerung am Zytoskelett durch die Bindung von Calcium/Calmodulin unterschieden werden. Beide Einwirkungen können zu einer verminderten Leitfähigkeit des Rezeptor-Ionenkanal-Komplexes führen. 2. Liganden-Bindungsstellen des P2X3-Rezeptors: Es wird nach den Agonisten- und Antagonisten-Bindungstellen gesucht. Unterschiede zwischen dem Bindungsverhalten von reversiblen (Suramin) und quasi-irreversiblen (PPADS) Antagonisten sind zu erwarten. 3. Hemmung von P2X3-Rezeptoren durch Ethanol und Trichlorethanol: Es soll geklärt werden, ob ein Zusammenhang zwischen dem Ausmaß der Trichlorethanol-induzierten Hemmung und der Ca2+-Permeabilität des Rezeptors besteht. 4. Hemmung von N-Typ Ca2+-Kanälen durch P2Y-Rezeptoren: Diese Fragestellung bezieht sich auf den Mechanismus der P2Y-Rezeptor-vermittelten Blockade von N-Typ Ca2+-Kanälen. Mögliche Alternativen sind die Vermittlung über ein inhibitorisches G-Protein, die Phosphorylierung des Kanals durch die Proteinkinase C oder die Abnahme der Ströme infolge des Anstiegs der intrazellulären freien Ca2+-Konzentration.