Einfluss struktureller Modifikationen von P2X3-Rezeptoren

P2X3受体结构修饰的影响

• 批准号: 5329988
• 负责人: Professor Dr. Peter Illes
• 金额: --
• 依托单位: Rudolf-Boehm-Institut für Pharmakologie und Toxikologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2008-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5329988?language=en
• 关键词: Einfluss; struktureller; Modifikationen; von; P2X3

Wir werden an humanen rekombinanten P2X3-Rezeptoren strukturelle Änderungen ausführen und die Rezeptorkonstrukte (Mutanten, Chimären) in Zelllinien (HEK 293- und C6BU-1) exprimieren. HEK 293-Zellen enthalten im Gegensatz zu C6BU-Zellen endogene P2Y-Rezeptoren und ermöglichen deshalb Untersuchungen zur Interaktion zwischen dem transfizierten (P2X3) und dem endogenen vorhandenen (P2Y1-2) Rezeptor. Es sollen die folgenden Fragestellungen bearbeitet werden: 1. Mechanismen der homologen und heterologen Desensibilisierung des P2X3-Rezeptors: Es soll zwischen der Phosphorylierung am N- oder C-Terminus durch Proteinkinase C und einer gestörten Verankerung am Zytoskelett durch die Bindung von Calcium/Calmodulin unterschieden werden. Beide Einwirkungen können zu einer verminderten Leitfähigkeit des Rezeptor-Ionenkanal-Komplexes führen. 2. Liganden-Bindungsstellen des P2X3-Rezeptors: Es wird nach den Agonisten- und Antagonisten-Bindungstellen gesucht. Unterschiede zwischen dem Bindungsverhalten von reversiblen (Suramin) und quasi-irreversiblen (PPADS) Antagonisten sind zu erwarten. 3. Hemmung von P2X3-Rezeptoren durch Ethanol und Trichlorethanol: Es soll geklärt werden, ob ein Zusammenhang zwischen dem Ausmaß der Trichlorethanol-induzierten Hemmung und der Ca2+-Permeabilität des Rezeptors besteht. 4. Hemmung von N-Typ Ca2+-Kanälen durch P2Y-Rezeptoren: Diese Fragestellung bezieht sich auf den Mechanismus der P2Y-Rezeptor-vermittelten Blockade von N-Typ Ca2+-Kanälen. Mögliche Alternativen sind die Vermittlung über ein inhibitorisches G-Protein, die Phosphorylierung des Kanals durch die Proteinkinase C oder die Abnahme der Ströme infolge des Anstiegs der intrazellulären freien Ca2+-Konzentration.

我们将在 Zelllinien（HEK 293- 和 C6BU-1）中对 P2X3-Rezeptoren Strukturelle änderungen ausführen 和 Rezeptorkonstrukte（Mutanten、Chimären）进行改造。 HEK 293-Zellen enthalten 是 C6BU-Zellen 内源性 P2Y-Rezeptoren 和 ermöglichen deshalb Untersuchungen zur Interaktion zwischen dem transfizierten (P2X3) 和 dem endogenen vorhandenen (P2Y1-2) Rezeptor。 Es sollen die folgenden Fragestellungen bearbeitet werden: 1. Mechanismen der 同源和异源 Desensibilisierung des P2X3-Rezeptors: Es soll zwischen der Phosphorylierung am N- oder C-Terminus durch Proteinkinase C and einer gestörten Verankerung am Zytoskelett durch die冯·宾东 钙/钙调蛋白 unterschieden werden。 Beide Einwirkungen können zu einer verminderten Leitfähigkeit des Rezeptor-Ionenkanal-Komplexes führen。 2. P2X3-受体的配体结合：是激动剂和拮抗剂的结合。 Unterschiede zwischen dem Bindungsverhalten von reversiblen (Suramin) 和准不可逆 (PPADS) Antagonisten sind zu erwarten。 3. 在乙醇和三氯乙醇中使用 P2X3-Rezeptoren：在使用时，请注意三氯乙醇的使用和 Ca2+-Permeabilität des Rezeptors besteht。 4. N-Typ Ca2+-Kanälen 与 P2Y-Rezeptoren 之间的关系：通过 P2Y-Rezeptor-vermittelten 封锁 N-Typ Ca2+-Kanälen 的机制来进行预防。 Mögliche Alternativen 是一种抑制 G 蛋白的替代品，通过蛋白激酶编码器的磷酸化作用，或与细胞内游离 Ca2+-Konzentration 的抗性有关。